[发明专利]纤维蛋白修饰开管柱及在单克隆抗体异构体分离中的应用

摘要

本发明公开了一种纤维蛋白修饰的开管柱及其在单克隆抗体异构体分离中的应用，该开管柱的制备方法包括以下步骤：将纤维蛋白通过物理吸附在毛细管柱内表面，得到纤维蛋白修饰的开管柱。本发明的开管柱以蛋白作为色谱固定相，其表面丰富的作用位点，可有效抑制蛋白的吸附，改善分离效果，提高分离选择性。本发明的开管柱对单克隆抗体的异构体表现了特殊的选择性。西妥昔单抗的六种不同形式的异构体获得成功分离，利妥昔单抗的五种异构体以及曲妥珠单抗的五种异构体被成功地从主峰中分离。

主权项

1.一种纤维蛋白修饰的开管柱的制备方法，其特征在于包括以下步骤：将纤维蛋白原溶液和凝血酶溶液溶解在含有氯化钠的磷酸盐缓冲液中配成蛋白水溶液，注入毛细管中，恒温反应4~8 h，氮气加热固化12 h，再用磷酸盐缓冲液和去离子水冲洗，氮气烘干，得到纤维蛋白修饰的开管柱；所述的纤维蛋白原溶液中，纤维蛋白原的浓度是0.5~4 mg/mL；所述的凝血酶溶液中，凝血酶的浓度是0.02~0.8 μM；所述的开管柱要经过预处理，预处理方法是：依次用氢氧化钠溶液、去离子水、盐酸溶液、去离子水冲洗开管柱，并烘干；所述的恒温反应和加热固化，温度是30~50℃；所述的开管柱，其材质是玻璃或石英。