[发明专利]一种基于HPLC-ELSD和偏最小二乘判别分析法的蜂蜜掺假检测方法

摘要

本发明公开了一种基于HPLC‑ELSD和偏最小二乘判别分析法的蜂蜜掺假检测方法，属于食品检测技术领域。本发明方法包括简单的样品预处理，采用亲水作用色谱分离‑蒸发光散射检测(HILIC‑ELSD)的方法分析纯真蜂蜜和掺有果葡糖浆或麦芽糖浆的蜂蜜样品中低聚糖及其异构体组分，并利用纯真蜂蜜和掺假蜂蜜的低聚糖组分指纹图谱的差异，通过偏最小二乘判别分析法进行数据处理进而实现掺假鉴别。本方法能成功的鉴别出果葡糖浆掺入量在10％以上、麦芽糖浆掺入量为5％以上的掺假蜂蜜样品。该方法对于C4植物源糖浆或C3植物源糖浆的掺假蜂蜜均能有效鉴别，所用分析仪器较普及，便于推广应用。

主权项

1.一种基于HPLC‑ELSD和偏最小二乘判别分析法的蜂蜜掺假检测方法，其特征在于，样品经水溶、过滤处理后，采用亲水作用色谱分离‑蒸发光散射检测的方法分析纯真蜂蜜和掺有果葡糖浆、麦芽糖浆的蜂蜜样品中低聚糖及其异构体组分，并利用纯真蜂蜜和掺假蜂蜜的低聚糖组分指纹图谱的差异，通过偏最小二乘判别分析法进行数据处理进而实现掺假鉴别；所述方法包括下列步骤：1)首先构建不同产地、不同蜜源的纯真蜂蜜低聚糖及其异构体组成的标准指纹图谱，即将若干个不同产地、不同蜜源的蜂蜜样品用水溶解定容和过滤，再对它们进行高效液相色谱分离和蒸发光散射检测，根据所得指纹图谱的相对保留时间确定共有特征峰或将所得色谱数据导入指纹图谱专用软件得到蜂蜜的低聚糖标准色谱指纹图谱并确定其共有特征峰；2)测定得到待检蜂蜜样品的低聚糖指纹图谱；3)将步骤2)获得的待检蜂蜜样品的指纹图谱的相对峰面积数据与步骤1)获得的若干个不同产地、不同蜜源的纯真蜂蜜样品的指纹图谱的相对峰面积数据组成矩阵，进行偏最小二乘判别分析；所述方法具体包括下列步骤：(1)待检蜂蜜样品的预处理样品预处理：称取1‑2g待检蜂蜜样品于25mL或50mL容量瓶内，蒸馏水定容，充分振摇混匀后，取1mL过0.45μm微孔滤膜，滤液用于低聚糖及其异构体的HPLC分析；(2)待检蜂蜜样品、低聚糖混合标样的液相色谱分析色谱条件：色谱柱为XBridgeTM Amide 3.5μm 4.6×250mm；流动相A是50％乙腈，流动相B是75％乙腈，二元梯度洗脱，梯度程序：0～20min，0～50％A；20～30min，50％A；30～33min，50～0％A；33～38min，100％B；柱温：35℃；流速：1.0mL/min；进样量：10μL；检测器ELSD的参数：漂移管温度为95℃；氮气流速为2.5mL/min；在此条件下分别进样分析低聚糖混合标样、多个纯真蜂蜜样品及待检蜂蜜样品，得到色谱指纹图谱；根据低聚糖混合标样的色谱保留时间定性纯真蜂蜜样品及待检蜂蜜样品的色谱指纹图谱中的单糖及不同聚合度低聚糖所对应的色谱峰，并以第7个共有峰为参考峰，计算各指纹峰的相对保留时间；(3)蜂蜜色谱指纹共有特征峰的确定通过纯真蜂蜜样品的低聚糖及其异构体的HPLC指纹分析，比较其色谱图，根据峰的相对保留时间确定8个共有特征峰，按出峰顺序以第7个共有特征蜂为参照，计算得到8个共有特征峰的相对保留时间；(4)偏最小二乘‑判别分析对共有色谱峰进行积分，以每个峰的峰面积与参考峰的峰面积的比值即相对峰面积为新变量，采用偏最小二乘‑判别分析方法进行判别分析，对检测的蜂蜜进行真假分类。