[发明专利]用斑马鱼鳔损伤炎症模型评价肺损伤治疗剂与诱导剂的方法

摘要

本发明提供了斑马鱼鳔损伤炎症模型的建立方法，以及应用该斑马鱼鳔损伤炎症模型评价肺损伤治疗剂与诱导剂功效的方法。本发明提供的斑马鱼鳔损伤炎症模型，具有简便、快速、经济、高效、高通量等优点；能准确反映肺损伤治疗机或诱导剂在体内的真实情况，可实现在体内高通量评价药物对治疗急性肺损伤炎症的功效，其评价药物功效的方法具有可靠、快速、高效、低廉、高性价比等优点，意义重大。

主权项

1.一种斑马鱼鳔损伤炎症模型的建立方法，包括如下步骤：(1)斑马鱼最佳发育阶段的确定取中性粒细胞绿色荧光转基因品系斑马鱼亲本交配、孵化，选择不同发育阶段的斑马鱼分别移入微孔板；根据不同的发育阶段将对应的微孔板均设为3个实验组：1个为诱导剂处理组，该组中对斑马鱼鳔腔注射单浓度的诱导剂；1个为溶剂处理组，该组中对斑马鱼鳔腔注射等体积的PBS；1个为空白对照组，该组中对斑马鱼不进行任何处理；然后，各实验组均加入相同体积的养鱼用水，在相同温度下恒温培养；当诱导剂处理斑马鱼至实验终点后，用立体荧光显微镜对斑马鱼鳔位置拍照并保存，对斑马鱼鳔位置聚集的中性粒细胞数量进行定性和定量评价，确定斑马鱼的最佳发育阶段；所述不同发育阶段的斑马鱼为4.5～6dpf的斑马鱼；所述最佳发育阶段的斑马鱼为5dpf的斑马鱼；(2)诱导剂最佳给药浓度的确定取5dpf的斑马鱼移入微孔板；设置空白对照组、溶剂注射组和不同给药浓度的诱导剂处理组：空白对照组对斑马鱼不进行任何处理，溶剂注射组对斑马鱼鳔腔注射PBS，诱导剂处理组对斑马鱼鳔腔分别注射等体积但不同给药浓度的诱导剂；然后，各实验组均加入相同体积的养殖用水，在相同温度下恒温培养；当诱导剂处理斑马鱼至实验终点后，用立体荧光显微镜对斑马鱼鳔位置拍照并保存，对斑马鱼鳔位置聚集的中性粒细胞数量进行定性和定量评价，确定诱导剂的最佳给药浓度；所述诱导剂的给药浓度为1～10mg/mL，所述诱导剂的最佳给药浓度为10mg/mL；(3)构建斑马鱼鳔损伤炎症模型取5dpf的斑马鱼移入微孔板；设置3个实验组：1个为诱导剂处理组，该组中对斑马鱼鳔腔注射10mg/mL的诱导剂，1个为溶剂注射组，该组中对斑马鱼鳔腔注射等体积的PBS；然后，各实验组均加入相同体积的养殖用水，在相同温度下恒温培养；当诱导剂处理斑马鱼至实验终点后，用立体荧光显微镜对斑马鱼鳔位置拍照并保存，对斑马鱼鳔位置聚集的中性粒细胞数量进行统计分析，根据统计学结果，判断已建立了斑马鱼鳔损伤炎症模型。