[发明专利]一种鲷鱼种质鉴定的方法及其应用

摘要

本发明公开了一种鲷鱼种质鉴定的方法及其应用，先后采用两对特异性引物进行扩增，并结合酶切的方法鉴别真鲷、黑鲷及二者的正反交后代。本发明所述方法能够在分子水平快速、准确的鉴定鲷鱼的种质；且能够清楚鉴别真鲷、黑鲷及二者正反交后代，为鲷鱼的品种鉴定、种质资源保护和育种等提供重要依据。

主权项

1.一种鲷鱼种质鉴定的方法，其特征在于，包含以下步骤：（1）以鲷鱼基因组DNA为模板，采用引物A进行特异性扩增，鉴别真鲷、黑鲷及二者的杂交后代；所述引物A的序列为SEQ ID NO：1~2；（2）以步骤（1）鉴别获得的杂交后代基因组DNA为模板，采用引物B进行特异性扩增；所述引物B的序列为SEQ ID NO：3～4；（3）酶切步骤（2）的扩增产物，鉴别正交后代和反交后代；其中，步骤（3）酶切过程采用的是限制性内切酶MspI，步骤（3）酶切的体系为：扩增产物10μL，灭菌双蒸水18μL，10×buffer Tango 2μL，酶10～20U，37℃酶切12 h；步骤（1）和步骤（2）的扩增体系为：总体积 20µL，其中含10×反应缓冲液 2μL，Mg²⁺ 2mmol/L，dNTP 200μmol/L,上下游引物各0.2μmol/L，Taq酶0.5U，DNA模板100 ng～200 ng，用灭菌双蒸水补足至20µL；步骤（1）扩增反应的条件为：94℃ 2min；94℃ 30s，57℃退火30s，72℃ 30s，30个循环；72℃ 延伸5min，4℃保存；步骤（2）扩增反应的条件为：94℃ 2min；94℃ 30s，55℃退火30s，72℃ 30s，30个循环；72℃延伸5min，4℃保存；步骤（1）的扩增产物采用8.0%的非变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离，步骤（3）酶切产物采用3%琼脂糖凝胶进行电泳分离。