[发明专利]一种提高骨髓间充质干细胞成脂分化效率的方法

摘要

本发明涉及一种提高骨髓间充质干细胞成脂分化效率的方法，包括MSC的提取及原代培养、MSC的传代培养和MSC的成脂分化表征。该方法控制细胞传代培养时培养液的更换量以及细胞的培养周期，得到不同数量的脂肪细胞，从而在不含有诱导因子的情况下仍能在聚苯乙烯细胞培养基底表面获得很高的MSC成脂分化效率。该方法具有体系简单、不含有额外生物因子、无细胞毒性、重复性高等特点。此方法能满足干细胞的体外培养以及临床应用的需求。

主权项

1.一种提高骨髓间充质干细胞成脂分化效率的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）选取大鼠骨髓间充质干细胞作为细胞模型，利用全骨髓贴壁法从新生SD大鼠的胫骨和股骨骨髓腔中提取MSC并进行培养，MSC的培养液为含有10%（体积比）胎牛血清(FBS)、100 U/mL青霉素、100 μg/mL链霉素以及2 mM L‑谷氨酰胺的低糖DMEM培养基，MSC提取后置于37 °C、5% CO₂的培养箱中进行原代培养，每2~3天进行更换一次新的培养液，直至MSC基本铺满培养瓶底，然后进行传代培养，传代时间不需要过早；（2）在进行细胞传代时，首先进行消化和离心操作，在离心结束后，吸出上层清液，即原先的细胞培养液，并不丢弃，而是将其与新配制的细胞培养液按80:20的体积比进行混合，然后重新加入离心管后进行重悬，并将MSC接种在细胞培养瓶表面，继续在37 °C和5% CO₂的条件下进行MSC培养，待MSC接近长满后重复进行传代操作；（3）经过3次传代培养之后，对MSC进行油红染色来检测脂肪细胞特异性表达物脂肪滴的产生和积聚以表征MSC成脂分化程度，首先用4%多聚甲醛对细胞进行固定，然后用3 mg/mL油红/异丙醇溶液进行脂肪滴染色，最后以2 μg/mL的DAPI溶液进行细胞核染色，于倒置荧光显微镜下进行观察和分析，统计出成脂分化的细胞数占细胞总数的百分比。