[发明专利]柑橘衰退病毒与柑橘裂皮病毒双重检测试剂盒及其应用

摘要

本发明公开一种柑橘衰退病毒与柑橘裂皮病毒双重检测试剂盒及其应用。本发明设计了柑橘衰退病毒与柑橘裂皮病毒的双重数字PCR定量检测试剂组合物。该试剂盒包含：病样RNA提取试剂、cDNA反转录合成试剂、数字PCR反应试剂、柑橘衰退病与柑橘裂皮病阳性对照样品模板和阴性对照样品模板。应用本发明试剂盒检测柑橘衰退病毒与柑橘裂皮病毒具有特异性强、抗杂质干扰更好、简便快速、检测灵敏度与现有的实时荧光定量PCR检测方法相当等优点，可用于柑橘衰退病毒与柑橘裂皮病毒的早期定性、定量检测以及流行病学调查等。

主权项

1.一种柑橘衰退病毒与柑橘裂皮病毒双重检测试剂盒，其特征在于，其组成包括：病样RNA提取试剂、cDNA合成试剂、数字PCR反应试剂、柑橘衰退病与柑橘裂皮病阳性对照样品模板和阴性对照样品模板；数字PCR反应试剂包含以下引物与探针：柑橘衰退病毒的特异引物及探针的序列为：上游引物STB1‑F：5'‑ TGTGCTGTGTACATACAAGCTAAAG ‑3'下游引物STB1‑R：5'‑ ATTTCCCAAGCTGCCTGAC ‑3'探针STB1‑P：FAM 5’‑ GTAACTACRACHTCATCAGCCCCTCG ‑3’ BHQ所述探针5’ 端荧光报告基因为FAM，3’ 端淬灭基团为BHQ；柑橘裂皮病毒的特异引物及探针的序列为：上游引物LPB1‑F：5'‑ GGAAACCTGGAGGAAGTCG ‑3'下游引物LPB1‑R：5'‑ CAGCAGCGAAAGGAAGGAG ‑3'探针LPB1‑P：HEX 5'‑ CCTGTTTCTCCGCTGGACGCC ‑3' BHQ所述探针5’端荧光报告基因为HEX，3’端淬灭基团为BHQ。