[发明专利]一种生产甘草次酸或其前体物的酿酒酵母工程菌及构建方法有效
| 申请号： | 201610965315.9 | 申请日： | 2016-11-04 |
| 公开（公告）号： | CN106566815B | 公开（公告）日： | 2019-11-08 |
| 发明（设计）人： | 李春;朱明;王彩霞;孙文涛;周安琪 | 申请（专利权）人： | 北京理工大学 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02;C12N15/53;C12N15/81;C12N1/19;C12P33/00;C12R1/865 |
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| 地址： | 100081 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开一种生产甘草次酸或其前体物：11‑羟基‑β‑香树脂醇，或11‑氧‑β‑香树脂醇，或30‑羟基‑β‑香树脂醇，或11，30‑羟基‑β‑香树脂醇，或30‑羟基‑11‑氧‑β‑香树脂醇，或30‑醛基‑11‑氧‑β‑香树脂醇的酿酒酵母工程菌及其构建方法，其生产步骤为分别构建β‑香树脂醇合酶表达盒、β‑香树脂醇的碳11位的氧化酶表达盒、11‑氧‑β‑香树脂醇的碳30位的氧化酶表达盒、细胞色素P450氧化还原酶表达盒，并共同导入酿酒酵母基因组中。本发明将甘草次酸的合成与酵母的生长耦合，实现了甘草次酸或其前体物的酵母合成，该方法不需要效应剂的诱导、工艺简单，可用于发酵生产甘草次酸及其关键前体物。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 生产 甘草 前体物 酿酒 酵母 工程 构建 方法 | ||
【主权项】：
1.一种生产甘草次酸或其前体物质的酿酒酵母工程菌的构建方法，其特征在于，利用从光果甘草中克隆得到的β‑香树脂醇合酶(bAS)基因，从乌拉尔甘草中通过克隆得到的β‑香树脂醇碳11位氧化酶UNI47基因其基因序列如SEQ IDNo.5所示，CYP450氧化还原酶CPR基因其基因序列如SEQ ID No.11所示，从苜蓿中克隆得到的11‑氧‑β‑香树脂醇碳30位氧化酶CYP72A63基因其基因序列如SEQ ID No.8所示，对其进行密码子优化并化学合成，然后利用酿酒酵母组成型启动子和终止子分别构建，PFBA1‑bAS‑TCYC1,TADH1‑PENO2‑UNI47‑TTYS1,TCYC1‑PGPD‑CYP72A63‑TADH1,TTYS1‑PPGK1‑CPR‑TPGK1的表达盒，以基因组整合的方式在酿酒酵母体内重构甘草次酸及其前体物合成途径，实现酿酒酵母合成甘草次酸或其前体物。
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