[发明专利]柑橘黄龙病菌和柑橘溃疡病菌双重检测试剂盒及其应用

摘要

本发明公开一种柑橘黄龙病菌和柑橘溃疡病菌双重检测试剂盒及其应用。本发明设计了柑橘黄龙病菌和柑橘溃疡病菌的双重数字PCR定量检测试剂组合物。该试剂盒包含：柑橘病样DNA提取试剂、数字PCR反应试剂、柑橘黄龙病和柑橘溃疡病阳性对照样品模板和阴性对照样品模板。应用本发明试剂盒检测柑橘黄龙病菌和柑橘溃疡病菌具有特异性强、抗杂质干扰更好、简便快速、检测灵敏度比现有的实时荧光定量PCR检测方法高约10倍等优点，可用于柑橘黄龙病菌和柑橘溃疡病菌的早期定性、定量检测以及流行病学调查等。

主权项

1.一种柑橘黄龙病菌和柑橘溃疡病菌双重检测试剂盒，其特征在于，其组成包括：病样DNA提取试剂盒、数字PCR反应试剂、柑橘黄龙病菌和柑橘溃疡病菌特异性引物及特异性探针、阳性对照样品模板以及阴性对照样品模板；所述引物与探针的序列为：柑橘黄龙病菌的特异引物及探针为：上游引物HLB1‑F：5'‑GGCTCAACCTTGGAACTGC‑3'下游引物HLB1‑R：5'‑TTGCTCCCCACGCTTTC‑3'探针HLB1‑P：FAM 5’‑TTGTCTAGAGTTTAGGAGAGGTGAGTGG‑3’ BHQ所述探针5’ 端荧光报告基因为FAM，3’ 端淬灭基团为BHQ；柑橘溃疡病菌的特异引物及探针为：上游引物KYB1‑F：5'‑GGACCGTCGCTGTCAAGTA‑3'下游引物KYB1 ‑R：5'‑CAACTGTAACGGTGGACCTC‑3'探针KYB1 ‑P：HEX 5'‑CACTGTTTGCCGACGCCAACG‑3' BHQ所述探针5’端荧光报告基因为HEX，3’端淬灭基团为BHQ。