[发明专利]一种海伦兜兰无菌播种快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种海伦兜兰无菌播种快速繁殖方法。本发明以合适胚龄的种子作为外植体，在独特的培养基上进行无菌播种、原球茎的分化、原球茎的增殖和壮苗培养，在短时间内生产出大量优质的海伦兜兰种苗。本发明的方法具有种子萌发率高、出苗快、种苗品质好等优点，海伦兜兰种苗可用于供应市场并应用于迁地保护和自然回归，有利于海伦兜兰的资源保护和可持续利用。

主权项

1.一种海伦兜兰无菌播种快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：a、人工授粉和种子的获得：选择生长健壮的海伦兜兰(Paphiopedilum helenae Aver.)母株进行异株人工授粉，选择授粉后120～180天的粉末状种子作为外植体进行无菌播种；b、外植体消毒和无菌播种：将授粉后120～180天的蒴果进行消毒处理，切开果实，将粉末状种子接种到种子萌发培养基上培养，培养温度25℃～30℃，光照度1500～2000勒克斯，光照时间12～16小时/天，胚萌发形成原球茎；所述的种子萌发培养基为：每升含有椰子汁50～100毫升、萘乙酸0.1～0.5毫克、活性炭1.0～2.0克、蔗糖30克、琼脂6～7克，其余为1/4MS培养基，pH 5.8～6.0；c、类原球茎的诱导和增殖：将步骤b得到的原球茎接种到类原球茎的诱导和增殖的培养基上培养，培养温度25℃～30℃，光照度1500～2000勒克斯，光照时间12～16小时/天，获得类原球茎，将类原球茎接种到新的类原球茎的诱导和增殖的培养基上进行增殖培养，培养温度25℃～30℃，光照度1500～2000勒克斯，光照时间12～16小时/天，类原球茎大量增殖；所述的类原球茎的诱导和增殖的培养基为：每升含有6‑苄基腺嘌呤5.0～10.0毫克、激动素5.0～10.0毫克、萘乙酸1.0～2.0毫克、椰子汁100～200毫升、蛋白胨1～2克、蔗糖30克、琼脂6～7克，其余为1/2MS培养基，pH 5.8～6.0；d、类原球茎的分化：将类原球茎接种到分化培养基上培养，培养温度25℃～30℃，光照度1500～2000勒克斯，光照时间12～16小时/天，类原球茎分化出小苗；所述的分化培养基为：每升含有6‑苄基腺嘌呤0.2～1.0毫克、萘乙酸1.0～2.0毫克、椰子汁100～200毫升、蛋白胨1～2克、活性炭1.0～2.0克、蔗糖30克、琼脂6～7克，其余为1/2MS培养基，pH 5.8～6.0；e、壮苗培养：将小苗接种到壮苗培养基上培养，培养温度25℃～30℃，光照度1500～2000勒克斯，光照时间12～16小时/天，获得完整植株；所述的壮苗培养基为：每升含有花宝1号1～2克、花宝2号1～2克、MS培养基的维生素和肌醇成分、萘乙酸1.0～2.0毫克、椰子汁100～200毫升、蛋白胨1～2克、香蕉匀浆50～150克、活性炭1.0～2.0克、蔗糖30克、琼脂6～7克，余量为水，pH 5.8～6.0；f、试管苗移栽：将完整植株在自然光下炼苗10～15天，然后取出植株洗净根部的培养基，移栽到植金石、松树皮和泥炭土按质量比2～3:2～3:1混合的栽培基质中培养获得海伦兜兰种苗。