[发明专利]一种利用聚球藻PCC 7942制备漆酶的方法

摘要

本发明公开了一种利用聚球藻PCC 7942制备漆酶的方法，包括步骤：将S7942 NSIIRA、S7942 NSIILA、aadA、rep‑origin、SLAC五个片段进行PCR扩增后重组，再扩增收获第一菌体，提取质粒作为重组质粒；聚球藻PCC 7942的自然转化：S1、将聚球藻PCC 7942菌落转移至Bg‑11液体培养基中活化培养7天后用作接种液；S2、将接种液添加至新鲜的Bg‑11液体培养基中培养，直至聚球藻PCC 7942菌落中的第二菌体的OD 730达到2.0～2.5，获得第一培养体系；S3、向第一培养体系中加入重组质粒并培养，直至第二菌体的OD 730稳定，获得第二培养体系；S4、将第二培养体系涂布于含有筛选抗性的Bg‑11固体培养基上并培养，直至出现转化子，获得漆酶。根据本发明的方法所获得的漆酶对染料具有良好的降解作用。

主权项

1.一种利用聚球藻PCC 7942制备漆酶的方法，其特征在于，包括步骤：/n将S7942 NSIIRA、S7942 NSIILA、aadA、rep-origin、SLAC五个片段进行PCR扩增后重组，再进行扩增收获第一菌体，提取所述第一菌体中的质粒，作为重组质粒；其中，所述S7942 NSIIRA、S7942 NSIILA、aadA、rep-origin、SLAC五个片段的基因序列为：/n序列号为SEQ NO: 1的上游引物：/nS7942 NSIIRA F：5-3 ACTACGCACAGCAATTTCGT；/n序列号为SEQ NO: 2的下游引物：/nS7942 NSIIRA R：5-3 GTAACCCCAGCGCGGTTG；/n序列号为SEQ NO: 3的上游引物：/nS7942 NSIILA F：5-3 GGTGTGCAGTTCCAAGCA；/n序列号为SEQ NO: 4的下游引物：/nS7942 NSIILA R：5-3 TTGAGGGACGAATCTTCAGC；/n序列号为SEQ NO: 5的上游引物：/naadA F：5-3 ATGAGGGAAGCGGTGATCGCCGAAGTATC；/n序列号为SEQ NO: 6的下游引物：/naadA R：5-3 TTATTTGCCGACTACCTTGGTGATCTC；/n序列号为SEQ NO: 7的上游引物：/nrep-origin F：5-3 CTCTTCCGCTTCCTCGCTC；/n序列号为SEQ NO: 8的下游引物：/nrep-origin R：5-3 ATCTCATGACCAAAATCCCTT；/n序列号为SEQ NO: 9的上游引物：/nSLAC F：5-3 ATGGATAGAAGAGGTTTTAATAGAAGAGT；/n以及，序列号为SEQ NO: 10的下游引物：/nSLAC R：5-3 CTAATGTTCATGTTCATGGGC；/n聚球藻PCC 7942的自然转化：S1、将聚球藻PCC 7942菌落转移至第一份Bg-11液体培养基中活化培养7天后用作接种液；S2、将所述接种液添加至第二份Bg-11液体培养基中培养，直至所述聚球藻PCC 7942菌落中的第二菌体的OD 730达到2.0~2.5，获得第一培养体系；S3、向所述第一培养体系中加入所述重组质粒，在800 lux~1000 lux的光照条件下培养，直至所述第二菌体的OD 730稳定，获得第二培养体系；S4、将所述第二培养体系涂布于具有第一筛选抗性的Bg-11固体培养基上，在1500 lux~2000 lux的光照条件下培养，直至出现转化子，获得所述漆酶。/n