[发明专利]一种单克隆抗体的纯化工艺有效
| 申请号： | 201610967853.1 | 申请日： | 2016-11-04 |
| 公开（公告）号： | CN106380507B | 公开（公告）日： | 2019-07-02 |
| 发明（设计）人： | 李桂林;牛晓旭;赵巧辉;张文婧;付光宇;吴学炜 | 申请（专利权）人： | 郑州伊美诺生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K1/36 | 分类号： | C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30 |
| 代理公司： | 郑州异开专利事务所(普通合伙) 41114 | 代理人： | 王霞 |
| 地址： | 450016 河南省郑州市*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种单克隆抗体的纯化工艺，首先采用弱酸缓冲液对蛋白样本进行三倍体积的稀释，调节pH值至4.2~4.4后进行等电点沉淀；采用0.22~0.45μm孔径的过滤器过滤，调节pH值至中性；采用中性盐进行盐析；采用0.05~0.22μm孔径过滤器将处理后的蛋白液直接过滤，弃上清，保留沉淀并富集；将富集的沉淀采用中性磷酸盐溶液进行复溶，复溶后的蛋白浓度为15‑20mg/ml，经动态透析，测量蛋白含量后分装入库。本发明流程简单，操作便捷，安全性高，可保证目的蛋白的高纯度（90%以上）、高回收率（95%以上），且成本低廉，可用于工业化大规模生产。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 单克隆抗体 纯化 工艺 | ||
【主权项】：
1.一种单克隆抗体的纯化工艺，其特征在于：包括下述具体步骤：第一步，采用20mM的醋酸‑醋酸钠缓冲液对蛋白样本进行三倍体积的稀释，持续搅拌过程中将pH值调节至4.2～4.4后进行等电点沉淀，去除样品中的杂蛋白；第二步，采用0.22～0.45μm孔径的二级深层过滤器对上述沉淀出的上清液进行过滤，并调节pH值至中性；第三步，采用中性盐对第二步过滤后的上清液进行盐析；所用中性盐为硫酸铵、Na2SO4或NaCl；第四步，采用0.05～0.22μm孔径三级深层过滤器将经第三步处理后的蛋白液直接过滤，弃上清，保留沉淀并富集；第五步，将富集的沉淀采用缓冲液进行复溶，复溶后的蛋白浓度为15‑20mg/ml，经动态透析，测量蛋白含量后分装入库。
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