[发明专利]一种重组酵母菌株及其构建方法和应用

摘要

本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种重组酵母菌株及其构建方法和应用。所述重组酵母菌株敲除gal1、gal7、gal10、ypl062w以及rox1基因，且包含经酵母同源重组整合到基因组上的6个基因片段，在其基础上本发明还进一步整合到酵母基因组上1个基因片段，获得更优的重组酵母。本发明构建基因敲除酵母菌株，为生产番茄红素提供优化的宿主细胞，选取特定来源组合的合成番茄红素的功能基因crtE、crtB和crtI，及特定的酵母内源基因和外源基因等，经模块化设计整合至基因敲除酵母菌株基因组上，获得一株全新的高产番茄红素的重组菌株。

主权项

1.一种重组酿酒酵母菌株，其特征在于，所述酿酒酵母基因组敲除gal1、gal7、gal10、ypl062w、rox1基因，且包含经酵母自身同源重组整合到其基因组上的如下基因片段：酵母trp1位点上游同源序列、CYC1终止子、Bt crtI、GAL10启动子、GAL1启动子、Pa crtB、PGK1终止子、酵母trp1位点下游同源序列顺次拼接而成的基因片段1；酵母leu2位点上游同源序列、LEU2标记、TDH2终止子、ACT1终止子、截短的HMG‑CoA还原酶基因tHMGR1、GAL10启动子、GAL1启动子、TmcrtE、GPM1终止子、酵母leu2位点下游同源序列顺次拼接而成的基因片段2；基因片段2中所述截短的HMG‑CoA还原酶基因tHMGR1如SEQ ID NO:3所示；基因片段2中TDH2终止子及其上游同源序列、DR‑Kl URA3‑DR营养标签、CYC1终止子、Bt crtI、GAL7启动子、基因片段2中ACT1终止子及其下游同源序列顺次拼接而成的基因片段3；酵母his3位点上游同源序列、HIS3标记、ENO2终止子、ACT1终止子、截短的HMG‑CoA还原酶基因tHMGR1、GAL10启动子、GAL1启动子、融合基因BTS1‑ERG20、FBA1终止子、酵母his3位点下游同源序列顺次拼接而成的基因片段4；基因片段4中所述截短的HMG‑CoA还原酶基因tHMGR1如SEQ ID NO:3所示；酵母YPRCdelta15位点上游同源序列、DR‑Kl URA3‑DR营养标签、CPS1终止子、转录因子INO2、GAL1启动子、酿酒酵母YPRCdelta15位点下游同源序列顺次拼接而成的基因片段5；酵母YNRCdelta9位点上游同源序列、GAL1启动子、转录因子INO2、CPS1终止子、DR‑Kl URA3‑DR营养标签、酵母YNRCdelta9位点下游同源序列顺次拼接而成的基因片段6；其中，在酵母基因组敲除gal1、gal7、gal10、ypl062w、rox1基因并同源重组基因片段1‑5后，获得中间菌株，所述重组酵母菌株在中间菌株基础上经自身同源重组整合基因片段6后获得。