[发明专利]一种光倒刺鲃鳍细胞系的构建方法

摘要

本发明涉及一种光倒刺鲃鳍细胞系的构建方法，该构建方法包括如下步骤：1)光倒刺鲃鳍的获取：采用亚甲基蓝和酒精联合对鱼体进行消毒；2)原代培养：采用含有细胞生长因子、胎牛血清、青霉素、链霉素、庆大霉素和两性霉素B的DMEM/F12或L‑15培养液进行培养；3)传代培养：传至第8代时，细胞培养液换成基础培养液，所述光倒刺鲃鳍细胞系建立成功。本发明的构建方法所获得的光倒刺鲃鳍细胞系能够连续传代并直接应用于生物学特性研究，能满足对光倒刺鲃这一经济物种种质资源保存和理论研究的需要，还可以反复冻融，可应用于细胞生物学、病毒学、毒理学、分子生物学、遗传学和免疫学等重要研究。

主权项

一种光倒刺鲃鳍细胞系的构建方法，其特征在于构建方法包括如下步骤：1)光倒刺鲃鳍的获取：先用20‑30mg/L亚甲基蓝浸泡光倒刺鲃鱼体消毒20‑30分钟，再用80‑120ppm的MS‑222麻醉光倒刺鲃鱼体；再以75％酒精消毒光倒刺鲃鱼体后，取其鳍条，加入HBSS消毒液浸泡取出的光倒刺鲃鱼体鳍组织；浸泡15‑30分钟后，将鳍组织用HBSS消毒液清洗3‑5次；2)原代培养：将通过步骤1)获得的鳍组织剪成约100mm3的组织小块，并将其接种于细胞培养瓶中，在22‑26℃培养箱中倒置过夜，次日再加入原代培养液，在22‑26℃培养箱中启动原代培养，每三天半量更换所述原代培养液，第7‑10天细胞开始从组织块中迁移，20‑30天长成细胞单层，则为原代鳍细胞；3)传代培养：原代鳍细胞铺满瓶底80％后开始传代，先吸出培养瓶中的原代培养液，以含0.1‑0.2％的胰蛋白酶的胰酶消化法悬起细胞，细胞变圆后，加入传代培养液1‑2mL以中和胰酶反应，首次传代按1:1传，此后按1:2进行传代，于22‑26℃培养箱中继续培养；每4‑6天传代一次，传至第8代时，细胞培养液换成基础培养液，所述光倒刺鲃鳍细胞系建立成功。