[发明专利]一种从猪精液中分离纯化精子细胞和外泌体的方法有效
| 申请号： | 201610975313.8 | 申请日： | 2016-11-07 |
| 公开（公告）号： | CN106544317B | 公开（公告）日： | 2021-02-23 |
| 发明（设计）人： | 邱婉玲;马继登;张进威;龙科任;李明洲;李学伟;王誉杰;刘灿;胡紫惠;赵瀚 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/076 | 分类号： | C12N5/076 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 夏艳 |
| 地址： | 611130 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明提供一种从猪精液中分离纯化精子细胞和外泌体的方法，步骤为：采集公猪精液按比例稀释，经过滤后离心分离沉淀和上清液；沉淀用体细胞裂解液裂解后再经离心沉降精子细胞得到精子细胞沉淀；上清液离心后保留上清，连续过滤除掉其中的细胞碎片，再通过超高速离心沉淀exosome，加入PBS溶液悬浮exosome。抽提精子细胞和exosome悬浮液中的总RNA，反转录mRNA和miRNA，并通过定量标记mRNA和miRNA对细胞和exosome纯度进行检测。本发明方法可提高猪精液精子细胞和exosome的分离准确率，并有效保证分离后的精子细胞和exosome的纯度，操作方法简单易行、杂质少。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 精液 分离 纯化 精子 细胞 外泌体 方法 | ||
【主权项】：
一种从猪精液中分离纯化精子细胞和外泌体的方法，其特征在于，步骤包括：(1)将采集到的公猪精液用精液稀释液按比例稀释，经40μm过滤器过滤掉精液中的组织碎片和杂物，再通过离心分离沉淀和上清液；(2)沉淀用体细胞裂解液裂解后再经离心沉淀精子细胞，加入PBS溶液清洗、重悬精子细胞，再离心后得到精子细胞沉淀；(3)上清液经离心后再保留上清液，连续通过0.45μm和0.22μm过滤器过滤掉exosome中的细胞碎片，再通过超高速离心沉淀exosome，加入PBS溶液悬浮exosome；(4)用Trizol法抽提精子细胞和exosome悬浮液中的总RNA，分别进行mRNA以及miRNA反转录和相关基因的定量，并对纯度进行检测。
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