[发明专利]一种促进月季种子无菌萌发的方法

摘要

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种促进月季种子无菌萌发的方法。一种促进月季种子无菌萌发的方法，包括如下步骤：河沙的无菌处理、无菌水的制备、种子的无菌处理、种子的预处理和无菌低温层积。本发明的促进月季种子无菌萌发的方法将低温层积与无菌相结合的技术方法应用于月季种子的无菌萌发上，可显著提高月季种子的出芽率，出芽时间短，可有效快速地获得月季的无菌组培苗，有利于缩短月季远缘杂交育种的进程。

主权项

一种促进月季种子无菌萌发的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)河沙的无菌处理：将湿润的河沙装入组培瓶中，沙子体积为组培瓶容积的1/2，然后采用高压蒸汽消毒，在压力为0.1013Mpa、温度为121℃的条件下进行消毒，消毒时间为25‑30min，灭菌后使其自然冷却，备用；(2)无菌水的制备：在组培瓶中装入70‑80mL的自来水，然后采用高压蒸汽消毒，在压力为0.1013mPa、温度为121℃的条件下进行消毒，消毒时间为25‑30min，得到无菌水；(3)种子的无菌处理：灭菌前，先将月季种子倒入盛有清水的容器中，并分搅拌，捞出漂浮在水面的瘪种子和杂质，然后在自来水中浸泡24h，浸泡完成后即可进行灭菌处理：先将月季种子先用0.1‑0.5％洗衣粉溶液中浸泡30min后，然后在流水下冲洗30min，再转入超净工作台上，用75％乙醇浸泡种子20‑30s，无菌水冲洗3次；再用0.1％升汞溶液浸泡种子12‑15min，此操作过程中轻轻震荡月季种子，使升汞溶液很好地接触种子，最后无菌水冲洗3次，得到无菌月季种子；(4)种子的预处理：将无菌月季种子用浓度为200‑250mg/L的无菌GA3溶液浸泡24h，备用；(5)无菌低温层积：在超净工作台上，将经过无菌处理的月季种子埋入无菌的沙子中，并在沙子中加入无菌水使其保持湿润，种子播种完毕，将装有沙子的组培瓶置于冰箱的冷藏室进行冷藏40‑60d；待冷藏结束后，将组培瓶移入培养室进行常温遮光培养10‑15d，待遮光培养结束后统计出芽率。