[发明专利]定量检测污泥中含硫氨基酸的方法

摘要

本发明公开一种定量检测污泥中含硫氨基酸的方法。本发明利用将污泥冷干、研磨、过筛制得样品；经过甲酸将污泥中的含硫氨基酸氧化为磺基丙氨酸和蛋氨酸砜；再利用浓盐酸对蛋白质进行水解，采用3kD滤膜对水解液进行超滤除杂提纯；采用邻苯二甲醛为衍生剂，使含硫氨基酸衍生产物具有荧光特性；衍生产物采用高效液相色谱进行定量分析。本方法与常规方法相比，具有操作简单、便利，毒性小，无需使用价格高昂的氨基酸分析仪，检测准确性高、灵敏度高、重复性好等优点。

主权项

1.一种定量测定污泥中含硫氨基酸的方法，其特征在于具体步骤如下：（1）将污泥样品于冷干机冷干，用球磨机对冷干样品进行研磨，而后过筛，低温保存；（２）将含半胱氨酸、蛋氨酸的污泥样品经过甲酸氧化，制备性质稳定的磺基丙氨酸和蛋氨酸砜；（３）用浓盐酸对污泥氧化液进行水解，水解液经3kD滤膜超滤，去除污泥中大分子杂质，纯化氨基酸；（４）将污泥中的氨基酸与衍生剂邻苯二甲醛进行衍生反应，生成有荧光吸收的衍生产物；进样针吸取2.5μl，pH=10.2的硼酸缓冲盐溶液，吸取0.5μl污泥氨基酸超滤液，吸取0.5μl邻苯二甲醛衍生剂，吸取3μl空气以最大速率混合6次；吸取32μl，pH=6.5的二水合磷酸二氢钠稀释液，吸取空气18μl以最大速率混合2次，完成氨基酸衍生过程；（５）将衍生产物用高效液相色谱进行分析，定量检测污泥中的含硫氨基酸；高效液相色谱分析中，流动相A是将甲醇、乙腈、水按照体积比为45:45:10混合制得，使用前超声脱气30min；流动相B是称取2.6408g磷酸二氢钾，加水溶解，于1000ml容量瓶定容，用10mol/l氢氧化钠调pH为6.5制得，使用前过0.22μm滤膜过滤，超声脱气30min；激发波长Ex为340nm、发射波长Em为460nm；所述流动相梯度如下表所示：。