[发明专利]深层过滤单克隆抗体细胞培养液的方法

摘要

本发明提供了一种中试放大规模澄清过滤抗PD‑1单克隆抗体的方法，该方法是采用D0HC和A1HC过滤膜两级深层过滤，通过小试模拟深层过滤的过程，采用测试得到的数据拟合数学方程计算得到中试规模所需深层过滤膜的面积，同时优化其它工艺参数而得到的，该方法能够使中试放大规模澄清过滤抗PD‑1单克隆抗体时，使用尽量少面积的的深层过滤膜，节约生产成本，而滤膜压力终点不大于15psi，过滤澄清液浊度小于20NTU，适合工业化放大生产。

主权项

1.中试规模深层过滤抗PD‑1单克隆抗体细胞培养液的方法，其特征在于，所述中试规模为体积为130～150L抗体细胞培养液，所述细胞培养液所用的细胞株为采用二氢叶酸还原酶缺陷型系统表达的抗PD‑1单克隆抗体的基因重组CHO细胞，所述细胞培养液细胞密度为100×10⁵～400×10⁵cell/mL，细胞活率为50％～90％，浊度为4000NTU～6000NTU，所述方法包含以下步骤：步骤1)深层过滤膜的组装：将深层过滤膜片组装至深层过滤器中，所述过滤膜片按过滤顺序先后为D0HC和A1HC两种型号，所述D0HC膜片总面积为2.25～3.45㎡，A1HC膜片总面积为1.65～2.70㎡；步骤2)预冲洗：采用注射用水对深层过滤膜进行预冲洗和润湿，注射用水预冲洗体积为50～150L/㎡，预冲洗通量为400～700LMH；步骤3)缓冲液平衡：采用缓冲液对深层过滤膜进行平衡，所述缓冲液为20mMNaPi缓冲溶液，pH为7.2，平衡体积为20～50L/㎡，缓冲液平衡通量为400～700LMH；步骤4)过滤细胞培养液：用蠕动泵将发酵罐中的细胞培养液送至深层过滤器中过滤，过滤通量为50～180LMH，细胞液澄清过滤压力终点为15psi，过滤工艺时间为1～3小时；步骤5)冲膜回收：用步骤3)所述缓冲液对深层过滤膜进行冲洗并回收缓冲液，冲洗体积为20～50L/㎡，冲洗通量为50～180LMH。