[发明专利]靶向VEGFA基因RNA干扰重组慢病毒载体及其构建方法

摘要

本发明涉及靶向VEGFA基因RNA干扰重组慢病毒载体的构建、筛选及其用途。本发明利用RNA干扰技术，针对VEGFA基因的不同靶序列，构建了四个能在293细胞中表达siRNA的慢病毒真核表达载体，干扰慢病毒是由pLv‑VEGFAshRNA、pMD2.G和pSPAX2载体共转染293T细胞培养获得。本发明靶向VEGFA基因RNA干扰重组慢病毒载体能高效特异性的抑制VEGFA基因表达，可用于制备治肿瘤相关性基因药物。

主权项

一种靶向VEGFA基因的siRNA重组慢病毒表达载体，是用于肿瘤VEGFA基因相关治疗性物质，干扰慢病毒是由pLv‑VEGFAshRNA、pMD2.G和pSPAX2载体共转染293T细胞培养获得；其中，所述的pLv‑VEGFAshRNA重组载体是在pLv‑shRNA载体的多克隆位点中连接双链DNA片段构建而得，酶切位点是BamHI和EcoRI；所述的双链DNA片段为以下序列中的一种：(1)VEGFA‑homo‑U1寡核苷酸序列1:正义链:5’GATCCAGGGCAGAATCATCACGAAGTCTCGAGACTTCGTGATGATTCTGCCCTTTTTTG3’反义链:5’AATTCAAAAAAGGGCAGAATCATCACGAAGTCTCGAGACTTCGTGATGATTCTGCCCTG3’(2)VEGFA‑homo‑U2寡核苷酸序列2:正义链:5’GATCCGCGCAAGAAATCCCGGTATAACTCGAGTTATACCGGGATTTCTTGCGCTTTTTG3’反义链:5’AATTCAAAAAGCGCAAGAAATCCCGGTATAACTCGAGTTATACCGGGATTTCTTGCGCG3’(3)VEGFA‑homo‑U3寡核苷酸序列3:正义链:5’GATCCCGAACGTACTTGCAGATGTGACTCGAGTCACATCTGCAAGTACGTTCGTTTTTG3’反义链:5’AATTCAAAAACGAACGTACTTGCAGATGTGACTCGAGTCACATCTGCAAGTACGTTCGG3’(4)VEGFA‑homo‑U4寡核苷酸序列4:正义链:5’GATCCGATAGAGCAAGACAAGAAACTCGAGTTTCTTGTCTTGCTCTATCTTTTTG3’反义链:5’AATTCAAAAAGATAGAGCAAGACAAGAAACTCGAGTTTCTTGTCTTGCTCTATCG3’。