[发明专利]一种N-乙酰谷氨酸激酶突变体及其应用有效
| 申请号： | 201610979843.X | 申请日： | 2016-11-08 |
| 公开（公告）号： | CN106434594B | 公开（公告）日： | 2019-09-10 |
| 发明（设计）人： | 徐美娟;饶志明;张景景;杨套伟;张显;葛小勋 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/12 | 分类号： | C12N9/12;C12N15/54;C12N1/21;C12P13/10;C12R1/15 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种既解除了L‑精氨酸对其的反馈抑制作用又显著提高了催化活性与热稳定性的N‑乙酰谷氨酸激酶突变体，属于生物工程领域。首先采用分子对接技术和对来源于钝齿棒杆菌CGMCC NO:0890的N‑乙酰谷氨酸激酶(CcNAGK)的结构分析，确定了E19位点对精氨酸的反馈抑制具有重要作用和位于底物结合口袋的三个关键氨基酸残基位点I74、F91与K234对酶的催化活性与热稳定性有着重大影响。然后，对其编码的氨基酸进行取代，将复合突变后基因argB4通过pDXW10引入高产精氨酸的钝齿棒杆菌中，可显著提高了钝齿棒杆菌中精氨酸的合成速率。最终在5L发酵罐中发酵96h后精氨酸产量由原来的43.2g/L提高至61.2g/L，L‑精氨酸产量提高了41.8％。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 乙酰 谷氨酸 激酶 突变体 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.一种N‑乙酰谷氨酸激酶突变体，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；其获得方法是：在中国专利CN201610286036.X中公布的argBF91H基因序列基础上，对argBF91H基因编码的氨基酸进行取代，所述氨基酸取代点为第19位的谷氨酸、第74位的异亮氨酸和第234位的赖氨酸。
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