[发明专利]植物基因组定点敲入方法有效
| 申请号： | 201610980732.0 | 申请日： | 2016-11-08 |
| 公开（公告）号： | CN108070610B | 公开（公告）日： | 2021-11-09 |
| 发明（设计）人： | 朱健康;陆钰明;王木桂;毛妍斐 | 申请（专利权）人： | 中国科学院分子植物科学卓越创新中心 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N5/10 |
| 代理公司： | 上海一平知识产权代理有限公司 31266 | 代理人： | 陈详;马思敏 |
| 地址： | 200032 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种植物基因组定点敲入方法，该方法对供体DNA片段进行修饰，借助定点切割核酸酶对目标基因的特定位点进行切割，将供体DNA片段整合入切割位点。实验结果表明，本发明的方法可以高效的将供体DNA片段定点整合至受体植物的基因组中，与现有方法相比，敲入效率可提高5‑10倍。 | ||
| 搜索关键词： | 植物 基因组 定点 方法 | ||
【主权项】：
1.一种适用于植物基因靶向敲入的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：a)制备待敲入的供体DNA片段提供待敲入的供体DNA片段，并对所述供体DNA片段的5’末端进行磷酸化修饰；b)提供表达定点切割核酸酶的DNA构建物或载体，所述定点切割核酸酶在植物细胞表达后可定点切割目标位点；c)将步骤a)制备的供体DNA片段和步骤b)提供的DNA构建物导入植物细胞中，所述定点切割核酸酶在所述植物细胞中表达，并且所述定点切割核酸酶对目标位点进行切割形成待敲入缺口，所述供体DNA片段整合至所述缺口，从而实现定点敲入。
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