[发明专利]一种虎源性成分的实时荧光PCR鉴定方法及其引物和探针在审
| 申请号： | 201610981062.4 | 申请日： | 2016-11-08 |
| 公开（公告）号： | CN106544433A | 公开（公告）日： | 2017-03-29 |
| 发明（设计）人： | 吴姗;章惠娟;张晓峰;杨兰花 | 申请（专利权）人： | 浙江省检验检疫科学技术研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州杭诚专利事务所有限公司33109 | 代理人： | 尉伟敏,赵越剑 |
| 地址： | 310000 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种虎源性成分的实时荧光PCR鉴定方法及其引物和探针，步骤包括(1)样本DNA提取；(2)实时荧光PCR扩增检测；(3)结果判定。引物包括上游引物及下游引物，所述上游引物的序列为5'‑CTTTATCTGTCTATACATGCAT‑3'，所述下游引物的序列为5'‑TGTAGGAGCCGTAGTATATT‑3'；所述探针的序列为5'‑FAM‑ACGAGGAATATACTACGGCT‑Eclipse‑3'。本发明相对于普通PCR方法，操作更简便，鉴定更高效和准确，将有效的对虎粪便、虎毛发、虎骨等进行鉴定，可用于对虎的野外追踪调查及保护。引物和探针具有很高的特异性和灵敏度，可有效的用于虎种保护和研究。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 虎源性 成分 实时 荧光 pcr 鉴定 方法 及其 引物 探针 | ||
【主权项】：
一种虎源性成分的实时荧光PCR鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)样本DNA提取：样本使用DNA抽提试剂盒进行DNA抽提，抽提后的DNA溶解在100μL水中得DNA提取液；(2)实时荧光PCR扩增检测：总体积为20μL的反应体系中，成分如下：10μL Premix Ex Taq，上游引物0.4μL，下游引物0.4μL，探针0.4μL，取上述DNA提取液1μL，用水补足体积至20μL。应用荧光定量PCR仪进行反应，反应程序为(1)95℃，10sec；(2)95℃，5sec；60℃，23sec；40个循环；(3)结果判定：检测的样品的Ct值小于等于35时，结果为阳性，Ct值大于35时为阴性。
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