[发明专利]多交叉扩增结合金纳米生物传感检测单增李斯特菌的方法

摘要

本发明公开了一种多交叉扩增结合金纳米生物传感检测单增李斯特菌的方法，所述方法在多交叉置换扩增中的交叉引物CP1或CP2的5’端标记生物素，在扩增引物C1或C2的5’端标记半抗原，所述方法针对单增李斯特菌lmo0733的扩增产物能被金纳米生物传感器可视化检测。所述方法便捷、快速、敏感、特异，适宜于各种核苷酸片段检测。

主权项

一种应用多交叉扩增结合金纳米生物传感检测目的基因的方法，所述方法包括以下步骤：(1)自所述目的基因片段的3’端起，设定第一任意序列F1s，第二任意序列P1s，自所述目的基因片段的5’端起，设定第三任意序列F2，第四任意序列P2，在所述第二任意序列P1s的5’端设定第五任意序列C1，和/或在所述第四任意序列P2的3’端设定第六任意序列C2s，在序列C1的3’端和5’端分别设定第七任意序列D1和第八任意序列R1,在序列C2s的5’端和3’端分别设定第九任意序列D2s和第十任意序列R2s；(2)提供置换引物F1，所述引物F1含有与序列F1s互补的序列，提供交叉引物CP1，所述引物CP1自5’端依次含有序列C1和与序列P1s互补的序列P1，提供置换引物F2，所述引物含有序列F2，提供交叉引物CP2，所述引物CP2自5’端依次含有与序列C2s互补的序列C2和序列P2，同时提供在交叉引物CP1或CP2的5’端标记有生物素的交叉引物CP1*或CP2*；(3)提供扩增引物，所述扩增引物包括含有序列C1的扩增引物C1，和/或含有与序列C2s互补的扩增引物C2，含有序列D1的扩增引物D1，含有序列R1的扩增引物R1，含有与序列D2s互补的扩增引物D2和含有与序列R2s互补的扩增引物R2，同时提供在所述扩增引物C1或C2的5’端标记半抗原的扩增引物C1*或C2*；(4)在链移位型聚合酶(Bst)、解链温度调节剂、引物存在下，使用目的基因片段作为模板恒温扩增DNA；(5)使用金纳米生物传感器检测步骤(4)的扩增产物。