[发明专利]一种宏转录组文库的建库方法在审
| 申请号： | 201610984532.2 | 申请日： | 2016-11-09 |
| 公开（公告）号： | CN106567133A | 公开（公告）日： | 2017-04-19 |
| 发明（设计）人： | 陈叶;潘小宝;丁方美;孙子奎 | 申请（专利权）人： | 上海派森诺生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06 |
| 代理公司： | 上海天翔知识产权代理有限公司31224 | 代理人： | 吕伴 |
| 地址： | 200231 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开的一种宏转录文库的建库方法，其特征在于，在RNA提取完成后，先用带有Oligo(dT)的磁珠富集真核生物的mRNA，mRNA产物在‑80℃保存以备后用，且将没有被Oligo(dT)的磁珠富集的其他RNA样品依次完成真核生物rRNA的去除和原核生物rRNA的去除，剩余产物‑80℃保存以备后用。将两次富集放入产物混合、纯化以及加入随机引物片段化，第一链的mix以及逆转录酶的共同作用下合成第一链(cDNA链)，然后加入第二链合成mix的完成第二链合成，再在3’加poly(A)，连接接头，进行PCR扩增，再进行凝胶片段选择，最后需要对文库进行检测。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 转录 文库 方法 | ||
【主权项】：
一种宏转录文库的建库方法，其特征在于，在RNA提取完成后，先用带有Oligo(dT)的磁珠富集真核生物的mRNA，mRNA产物在‑80℃保存以备后用，且将没有被Oligo(dT)的磁珠富集的其他RNA样品依次完成真核生物rRNA的去除和原核生物rRNA的去除，剩余产物‑80℃保存以备后用。将两次富集放入产物混合、纯化以及加入随机引物片段化，第一链的mix以及逆转录酶的共同作用下合成第一链(cDNA链)，然后加入第二链合成mix的完成第二链合成，再在3’加poly(A)，连接接头，进行PCR扩增，再进行凝胶片段选择，最后需要对文库进行检测，具体包括如下步骤：(1)真核mRNA纯化步骤；(2)真核生物rRNA去除步骤；(3)原核生物rRNA去除步骤；(4)所用RNA富集以及RNA的片段化步骤；(5)第一链合成步骤；(6)第二链合成步骤；(7)加A、加接头步骤；(8)磁珠片段选择步骤；(9)PCR扩增以及片段选择步骤；(10)文库质检步骤。
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