[发明专利]一种快速低成本筛选蛋白质表达条件的方法

摘要

本发明涉及一种快速低成本筛选蛋白质表达条件的方法，步骤如下：(1)对表达菌株分组并进行生长培养，制得诱导前菌液样品；(2)对诱导前菌液样品再次分组并进行诱导培养，制得诱导后菌液样品；(3)取诱导前菌液样品和诱导后菌液样品经固液分离，重悬菌体，制得菌体重悬液；取菌体重悬液与上样缓冲液混合，检测，得到A1和B1；(4)取菌体重悬液与裂解液混合均匀，超声破碎、固液分离，吸附后检测，得到C1；固液分离后的固体与上样缓冲液混合均匀，检测，得到D1；(5)经过数据分析，筛选培养条件。本发明无需昂贵设备投入，实验结果准确，大幅度减少培养基用量、培养瓶清洗和设备使用频率，大大缩短实验准备时间和结果分析时间。

主权项

1.一种快速低成本筛选蛋白质表达条件的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）按照生长条件对表达菌株分组并进行生长培养，制得诱导前菌液样品；（2）按照诱导条件对诱导前菌液样品再次分组并进行诱导培养，制得诱导后菌液样品；（3）取步骤（1）制得的诱导前菌液样品和步骤（2）制得的诱导后菌液样品经固液分离获得菌体，然后用菌体裂解液重悬菌体，制得菌体重悬液；取部分菌体重悬液与上样缓冲液混合，然后在95～100℃加热12～18min，经检测，得到诱导前菌液样品蛋白总量A1和诱导后菌液样品蛋白总量B1；所述菌体裂解液组分如下：25mM氯化钠，1mg/ml 溶菌酶，1mM苯甲基磺酰氟，25mM Tris‑HCl，pH8.0；（4）取步骤（3）制得的剩余的菌体重悬液与裂解液混合均匀，冰浴中经超声破碎、固液分离，分离出的液体中含有携带标签的目的蛋白，经相应的亲和吸附珠吸附后，经检测，得到诱导后可溶性蛋白量C1；超声破碎固液分离后的固体与上样缓冲液混合均匀，在95～100℃加热12～18min，经检测，得到诱导后非可溶性蛋白量D1；（5）根据步骤（3）获得的诱导前菌液样品蛋白总量A1和诱导后菌液样品蛋白总量B1数据，以及步骤（4）获得的诱导后可溶性蛋白量C1和诱导后非可溶性蛋白量D1，按照如下公式计算诱导效率和表达效率，筛选最优的培养条件：。