[发明专利]脯氨酸亚细胞分离方法

摘要

本发明公开了一种脯氨酸亚细胞分离方法，取水稻幼苗样品在磺基水杨酸中冰浴研磨成匀浆；研磨液在3000r/min离心5min；下层沉淀物a备用；上清液a在10000r/min离心30min，得到上清液b，沉淀物b；用Tris‑HCl溶液溶解混合；均浆取600g在4℃离心，沉淀物c为细胞壁部分；上清液c为细胞器部分；将上清液c和沉淀物c分别10000r/min离心30min，分别保留沉淀物d、沉淀物e；分别加入3％的磺基水杨酸溶解，继续10000r/min离心，再分别保留下部的沉淀物f、沉淀物g；分别加入3％的磺基水杨酸溶解，超声处理30min，沸水浴30min，4℃3000r/min离心10min，得到的上清液d、上清液e分别为细胞器和细胞壁组分。可以方便直接的测定亚细胞结构中脯氨酸含量。

主权项

一种植物亚细胞中脯氨酸的分离提取方法，其特征在于，具体按照以下步骤进行：步骤1，取水稻幼苗样品在3％磺基水杨酸中冰浴研磨成匀浆；步骤2，将步骤1得到的研磨液在3000r/min的条件下，4℃离心5min；下层沉淀物a留作备用；上清液a在10000r/min离心30min，得到上清液b为细胞液组分用于分析脯氨酸，沉淀物b留作备用；步骤3，将步骤2中的沉淀物a、沉淀物b用4‑6ml的Tris‑HCl溶液溶解混合均匀；步骤4，将步骤3得到的均浆取600g在4℃离心1min，离心转速为2500r/min，沉淀物c为细胞壁部分；上清液c为细胞器部分；步骤5，将步骤4得到的上清液c和沉淀物c分别在4℃下10000r/min离心30min，分别保留下部的沉淀物d、沉淀物e；步骤6，在沉淀物d、沉淀物e中分别加入3‑5ml的3％的磺基水杨酸溶解、混合均匀，继续在10000r/min离心30min，再分别保留下部的沉淀物f、沉淀物g；步骤7，在沉淀物f、沉淀物g中分别加入3‑5ml的3％的磺基水杨酸溶解、混合均匀，超声处理30min，沸水浴30min，4℃、3000r/min离心10min，得到的上清液d、上清液e分别为细胞器和细胞壁组分。