[发明专利]一种复合胶原蛋白海绵的制备方法

摘要

本发明公开了一种复合胶原蛋白海绵的制备方法，属于医用辅助材料制备技术领域。本发明先将鳗鲡鱼皮去鳞、脱脂后处理后，再酶解、盐析、浓缩，得到鳗鲡鱼皮胶原蛋白，再将木醋杆菌进行发酵制备细菌纤维素膜，最后再与柠檬酸溶液等倒入模具冻干成形，即可得到复合胶原蛋白海绵，鳗鲡鱼皮中的胶原蛋白含量非常高，几乎无杂蛋白，利用细菌纤维素将胶原蛋白牢牢镶嵌在其网状结构中，在冻干后密度增大，并且机械性能增强，不易变形，本发明制得的复合胶原蛋白海绵具有较高的密度，胶原分子之间结合紧密，孔隙大小及分布均匀，具有较高的机械强度和较好的体内及降解稳定性，且海绵粘附性好，使用过程中形态完整率高，具有广阔的应用前景。

主权项

一种复合胶原蛋白海绵的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）取200～300g鳗鲡鱼皮，人工去除其表面的鱼鳞，将去鳞后的鱼皮用去离子水洗涤3～5次后，置于烧杯中，再加入400～500mL质量分数为10%氢氧化钠溶液，搅拌浸泡30～40min后加热煮沸1～2h，使鱼皮脱脂，将脱脂后的鱼皮取出，并置于绞肉机中绞碎5～10min，得到碎鱼皮，将碎鱼皮加入到酶解罐中，再加入1～2g胃蛋白酶，在35～40℃下搅拌酶解3～4h，酶解结束，收集酶解罐中的物料，并置于离心机中，在5000～6000r/min下离心20～30min，收集上清液；（2）将上述上清液加入到烧杯中，再加入3～5g氯化钠，搅拌5～10min后，静置1～2h，使鱼皮胶原蛋白盐析出来，盐析结束，将盐析液过滤，收集滤渣，将滤渣加入到截留量为12000～15000道尔顿的透析袋中，以蒸馏水为透析液，于0～4℃下透析24～26h，每隔3～4h更换透析液一次，透析完成后，将透析袋置于聚乙二醇中浓缩6～8h，得到鳗鲡鱼皮胶原浓缩液，并将其进行喷雾干燥，得到干燥物，即鳗鲡鱼皮胶原蛋白，备用；（3）称取10～20g蔗糖、6～8g蛋白胨、8～12g酵母粉、3～5g磷酸氢二钾、0.3～0.5g柠檬酸和600～700mL去离子水，加入到培养皿中，搅拌混合3～5min后，移入灭菌罐中，在100～110℃下高温灭菌5～10min后，转移至发酵罐中，再按8～10%接种量将木醋杆菌接种到发酵罐中，在25～35℃下厌氧发酵3～4天，发酵结束，将细菌纤维素膜取出，并至于烧杯中，加入去离子水将其浸没后，再对其进行加热至沸腾，保温1～2h后，将细菌纤维素膜取出并用去离子水洗涤3～5次，得到细菌纤维素；（4）称取100～200g上述细菌纤维素、50～60g步骤（2）备用的鳗鲡鱼皮胶原蛋白和3～5g黄原胶加入到烧杯中，再加入300～400g质量分数为1%柠檬酸溶液，磁力搅拌5～10min后，倒入模具中，在‑45～‑35℃下冷冻干燥24～26h，即可得到复合胶原蛋白海绵。