[发明专利]一种铜绿假单胞菌的高效富集培养方法

摘要

本发明公开了一种铜绿假单胞菌的高效培养富集方法，包括如下步骤1)使用连续培养富集装置；2)用无菌水作溶剂配制含胰蛋白胨、酵母浸粉和氯化钠的营养液,加入到高位水箱中；营养液以重力流方式切向进入培养富集器本体中，使营养液形成水力旋流搅拌；将铜绿假单胞菌加入到培养富集器本体内，控制泵抽吸流速，使铜绿假单胞菌代谢产物和废弃的营养液一起经管式超滤膜组件后，经泵排出，培养富集后的铜绿假单胞菌被截留在培养富集器本体内并沉积在培养富集器本体漏斗状部，经浓菌液收集口排出并收集。本发明的方法使中碳源连续补入，保证了培养器内菌株始终处于碳源充足状态，将对细菌活性有抑制作用的代谢产物排出，细菌能够一直保持高速生长。

主权项

一种铜绿假单胞菌的高效培养富集方法，其特征是包括如下步骤：1)使用连续培养富集装置，所述装置包括高位水箱(1)和培养富集器(2)，高位水箱的顶壁内表面设置有紫外灭菌灯(3)，在高位水箱的顶壁上设置有第一透气孔(4)和加料孔(10)，脱脂棉与第一透气孔活动连接，所述培养富集器包括培养富集器本体(5)，培养富集器本体的中上部呈圆筒状，下部呈漏斗状，圆筒状部分的径深比为1:3.5‑4，培养富集器本体的顶壁上设置有第二透气孔(6)和菌种加入口(11)，脱脂棉与第二透气孔活动连接，在培养富集器本体圆筒状部分高的7/8‑9/10的位置设置有高液位传感器，在培养富集器本体圆筒状部分高的3/5‑2/3位置设置有低液位传感器，在培养富集器本体内部设置有管式超滤膜组件(7)，管式超滤膜组件的出口通过管道与设置在培养富集器本体外的泵(8)连接，培养富集器本体的底部设置有浓菌液收集口(9)，高位水箱的底部通过管道与培养富集器本体的底部的切向进入口连接；高位水箱的底部与培养富集器本体顶部之间的高度差≧2米；高液位传感器、低液位传感器、营养液进液阀门(12)和泵(8)分别通过导线与自动控制系统连接；2)用无菌水作溶剂配制含胰蛋白胨、酵母浸粉和氯化钠的营养液,加入到高位水箱(1)中；3)营养液进液阀门(12)打开，高位水箱中的营养液以流速2‑3m/s，以重力流方式切向进入培养富集器本体(5)中，使营养液形成水力旋流搅拌；将铜绿假单胞菌从菌种加入口(11)加入到培养富集器本体内，使所述菌株与营养液混合并增殖，当培养富集器本体内液位达到高液位时，营养液进液阀门关闭，控制泵(8)以膜通量＝15‑20L/m2·h的抽吸流速，使铜绿假单胞菌代谢产物和废弃的营养液一起经管式超滤膜组件后，经泵排出，当培养富集器本体内液位达到低液位时，泵(8)停止；4)营养液进液阀门打开；高位水箱中的营养液以流速2‑3m/s，以重力流方式切向进入培养富集器本体(5)中，使营养液形成水力旋流搅拌；当培养富集器本体内液位达到高液位时，营养液进液阀门关闭，控制泵(8)以膜通量＝15‑20L/m2·h的抽吸流速，使铜绿假单胞菌代谢产物和废弃的营养液一起经管式超滤膜组件后，经泵排出，当培养富集器本体内液位达到低液位时，泵停止；5)重复步骤4)；6)培养富集后的铜绿假单胞菌被截留在培养富集器本体内并沉积在培养富集器本体漏斗状部，经浓菌液收集口(9)排出并收集。