[发明专利]高纯度脐带血干细胞的分离方法和试剂盒有效
| 申请号： | 201610994346.7 | 申请日： | 2016-11-11 |
| 公开（公告）号： | CN106434545B | 公开（公告）日： | 2019-12-03 |
| 发明（设计）人： | 唐明淇;赵涌 | 申请（专利权）人： | 北正赛欧(北京)生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 11595 北京科石知识产权代理有限公司 | 代理人： | 高元吉<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 100044 北京市昌平区回龙观镇中关村*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及脐带血干细胞的分离方法和试剂盒。其中所述方法包括稀释步骤、沉淀步骤、分层步骤和纯化步骤。其中，稀释步骤中的细胞稀释液为PBS液或0.8‑1.0重量％氯化钠水溶液，沉淀步骤中的细胞沉淀剂为4‑10重量％的羟乙基淀粉水溶液，分层步骤中的细胞分层液为由聚蔗糖和/或泛影葡胺配制成的密度为1.074‑1.076g/ml的水溶液，纯化步骤中的细胞纯化液为由聚蔗糖配制成的密度为1.090‑1.095g/ml的水溶液。通过本发明能够得到具有更高纯度的有效干细胞，杂质细胞更少，在临床应用上具有重要意义。 | ||
| 搜索关键词： | 纯度 脐带血 干细胞 分离 方法 试剂盒 | ||
【主权项】：
1.一种脐带血干细胞的分离方法，其包括下列步骤：/n稀释步骤：将脐带血样品与细胞稀释液混合；/n沉淀步骤：加入沉淀剂，并静置沉降以得到含有干细胞的上层细胞液，将所述含有干细胞的上层细胞液离心浓缩，得到细胞沉淀；/n分层步骤：将所述细胞沉淀铺在细胞分层液上以1800-2200转/分转速离心15-25分钟，得到中间云雾状有核细胞；/n纯化步骤：将所述有核细胞铺在细胞纯化液上以1600-1800转/分的转速离心32-40分钟，得到两条细胞带，从而使功能受损的有核细胞以及刚开始或即将开始衰老的红细胞与干细胞分离，取下方细胞带中的细胞即为纯化的干细胞；其中，/n所述细胞稀释液为PBS液或0.8-1.0重量％氯化钠水溶液，/n所述细胞沉淀剂为4-10重量％的羟乙基淀粉水溶液，/n所述细胞分层液为由聚蔗糖和/或泛影葡胺配制成的密度为1.074-1.075g/ml的水溶液，/n所述细胞纯化液为由聚蔗糖配制成的密度为1.092-1.095g/ml的水溶液。/n
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