[发明专利]一种辽刺参低聚肽辅助降血糖功能的研究方法

摘要

本发明涉及一种辽刺参低聚肽辅助降血糖功能的研究方法，属于生物科技技术领域。具体步骤如下：小鼠糖尿病模型建立及降血糖试验；糖尿病小鼠各项指标检测；脏器系数计算；血清一氧化氮合酶活力测定；血清一氧化氮含量测定；血清超氧化物歧化酶活力测定；血清丙二醛含量测定；统计学处理：用SPSS22.0软件进行显著性分析，结果用表示。本发明研究方法表明，辽刺参低聚肽不仅对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠血糖升高有一定的辅助治疗作用，而且还能显著改善糖尿病小鼠体内抗氧化能力，有效清除自由基，提高体内抗氧化酶的活力，预防糖尿病并发症的发生，为海参低聚肽对糖尿病辅助降血糖方面产品的开发利用提供理论依据。

主权项

1.一种辽刺参低聚肽辅助降血糖功能的研究方法，其特征在于：所述的研究方法具体步骤如下：(1)小鼠糖尿病模型建立及降血糖试验：选择实验对象为昆明种小鼠，雄性，体重20±2g，禁食不禁水12h后，小鼠腹腔按照160mg/kg注射四氧嘧啶；经过5d自由饮食后，禁食不禁水12h，测血糖值，选用血糖值在10mmol/L以上的小鼠50只，随机分成阴性对照组、阳性对照组和辽刺参低聚肽组，每组10只，自由采食；按照人体推荐用量的20倍、10倍和5倍分别作为辽参低聚肽高、中、低剂量组的灌胃剂量，依次为0.05g/kg、0.017g/kg、0.0085g/kg，其中阳性对照组灌胃双胍水溶液，剂量为0.05g/kg，各组小鼠每日灌胃1次，连续灌胃42d，自由进食、饮水，每天记录小鼠进食量和饮水量，每两周称体重，禁食12h后测量血糖值，末次灌胃后对小鼠进行眼球取血，离心取血清备用，断颈处死；(2)糖尿病小鼠各项指标检测：从实验开始每天记录小鼠摄食量、饮水量和体重，每两周尾尖取血测血糖一次；(3)脏器系数计算：末次灌胃结束后，眼球取血后处死，解剖分别取胸腺和脾脏，观察脏器之间的粘连程度后，称重计算胸腺与脾脏的脏器系数；胸腺系数＝胸腺平均重量(mg)/小鼠平均体重(g)；脾脏系数＝脾脏平均重量(mg)/小鼠平均体重(g)；(4)血清一氧化氮合酶活力测定：按南京建成生物工程研究所的一氧化氮合酶(NOS)试剂盒(A014-2)说明书对小鼠的血清进行检测操作，测定原理：NOS催化L-Arg和分子氧化反应生成NO，NO与亲核性物质生成有色化合物，在530nm波长测定吸光度，根据吸光度的大小可计算出NOS活力；(5)血清一氧化氮含量测定：按南京建成生物工程研究所的一氧化氮(NO)试剂盒(A012硝酸还原酶法)说明书对小鼠的血清进行检测操作，NO化学性质活泼，体内代谢转化为硝酸盐(NO3-)和亚硝酸盐(NO2-)，血清(NO3-)与(NO2-)浓度之和为(NO3-+NO2-)才能准确代表体内NO水平；(6)血清超氧化物歧化酶活力测定：按南京建成生物工程研究所的超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(A001-3：WST-1法)说明书对小鼠的血清进行检测操作；(7)血清丙二醛含量测定：按南京建成生物工程研究所的丙二醛试剂盒(A003-1)说明书对小鼠的血清进行检测操作，测定意义：机体通过酶系统和非酶系统产生氧自由基，后者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸引发脂质过氧化作用，并由此形成脂质过氧化物，使组织细胞受损伤；(8)统计学处理：用SPSS22.0软件进行显著性分析，结果用表示。