[发明专利]一种非核糖体多肽活性产物的获得方法在审
| 申请号： | 201611000841.8 | 申请日： | 2016-11-14 |
| 公开（公告）号： | CN106434718A | 公开（公告）日： | 2017-02-22 |
| 发明（设计）人： | 占纪勋;于大禹 | 申请（专利权）人： | 杭州唯铂莱生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C12N15/63;C12N15/66;C07K19/00 |
| 代理公司： | 广州市越秀区哲力专利商标事务所(普通合伙)44288 | 代理人： | 胡拥军 |
| 地址： | 310000 浙江省杭州市*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种非核糖体多肽活性产物的获得方法，其包括：通过聚合酶链式反应分别扩增出目标基因片段G1和G2，然后将G1连接到载体的NheI和PmlI位点之间，构建质粒P1，G2连接到另一个载体的NdeI和PmlI位点之间，构建质粒P2的步骤；和，扩增出目标基因片段G3的步骤；和，将G3连接到P1的AscI和PmlI位点之间或P2的BsrGI和PmlI位点之间，获得重组质粒P3的步骤；和，将P1、P2或P3与包含NpgA基因片段的质粒P4共转化导入标准菌株ATCC 208288，得到基因工程菌的步骤；通过合理设计并重新构建基因工程菌，更有效地生产非核糖体多肽。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 核糖体 多肽 活性 产物 获得 方法 | ||
【主权项】：
一种非核糖体多肽活性产物的获得方法，其特征在于，其包括：以纯化的Beauveria bassiana ATCC 7159菌株DNA为模板，通过聚合酶链式反应分别扩增出具有AscI位点的目标基因片段G1和具有B srGI位点的目标基因片段G2，然后将G1连接到载体的NheI和PmlI位点之间，构建质粒P1，G2连接到另一个载体的NdeI和PmlI位点之间，构建质粒P2的步骤；和，以P1和P2为模板，通过重叠延伸PCR技术，扩增出目标基因片段G3的步骤；和，将G3连接到P1的AscI和PmlI位点之间或P2的BsrGI和PmlI位点之间，获得重组质粒P3的步骤；和，将P1、P2或P3与包含NpgA基因片段的质粒P4共转化导入标准菌株ATCC 208288，得到基因工程菌的步骤；和将基因工程菌进行培养发酵，提取，得到非核糖体多肽活性产物的步骤。
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