[发明专利]一种蛋白质甲基化的分析处理方法及其应用

摘要

本发明涉及一种蛋白质甲基化的分析处理方法，利用甲基化修饰的赖氨酸和精氨酸会抑制胰蛋白酶的酶切这一特性，发展了一种综合了重标甲硫氨酸细胞培养氨基酸稳定同位素标记(heavy methyl stable isotope labeling by amino acids in cell culture，hM‑SILAC)，多酶酶切和强阳离子交换微柱(SCXtip)分离的样品处理方法，并将其应用于甲基化蛋白质组的规模化分析中。通过结合多酶酶切策略，有效的降低了非甲基化来源的漏切位点，并通过高pH范围的强阳离子交换色谱的分离策略，有效的克服了含有组氨酸的肽段的干扰。从而极大的提高了甲基化肽段的分离特异性。

主权项

1.一种蛋白质甲基化的分析处理方法，其特征在于：(1)利用重标甲硫氨酸细胞培养氨基酸稳定同位素标记技术将蛋白质中的赖氨酸和精氨酸上的甲基化修饰基团进行重标标记；(2)对步骤(1)得到的重甲基化修饰后的蛋白质进行多酶酶切处理，所述多酶为胰蛋白酶、赖氨酸酶和精氨酸酶；(3)对步骤(2)得到的蛋白质酶解液进行离心辅助的基于强阳离子交换微柱(SCXtip)的甲基化肽段分离，微柱分离时，清洗剂为78％-82％乙腈，勃-罗二氏缓冲溶液(Britton&Robinson Universal Buffer，BRUB)，清洗剂pH值为8.5-9.5，以降低组氨酸肽段的干扰，得到甲基化蛋白质组。