[发明专利]一种水稻核苷酸片段人工加接头的方法在审
| 申请号： | 201611008369.2 | 申请日： | 2016-11-16 |
| 公开（公告）号： | CN106520825A | 公开（公告）日： | 2017-03-22 |
| 发明（设计）人： | 朱子超;李贤勇;王楚桃;何永歆;蒋刚;欧阳杰;黄乾龙;管玉圣;郭爽 | 申请（专利权）人： | 重庆市农业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/66 |
| 代理公司： | 重庆信航知识产权代理有限公司50218 | 代理人： | 穆祥维 |
| 地址： | 401329*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种水稻核苷酸片段人工加接头的方法，步骤为1)以含目的片段的水稻基因组或者cDNA为模板，用扩增目的片段的前后引物(S1F和S1R表示)、高保真酶进行PCR扩增；经1％琼脂糖胶电泳检测胶回收与预期大小一致的条带；2)将S1F和S1R分别与包含有重组位点同源序列、线性化质粒酶切位点序列的接头连接，进行人工合成；3)以P2为模板，S2F和S2R为引物，用高保真酶进行PCR扩增；经1％琼脂糖胶电泳检测、胶回收与预期大小一致的条带，胶回收产物用P3表示；4)P3就是在目标片段两侧加上接头的目的产物，用它与线性化的质粒连接，进行后面的基因工程操作。本发明可以显著提高给水稻核苷酸片段人工加接头的成功率，加快载体构建进程。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 水稻 核苷酸 片段 人工 接头 方法 | ||
【主权项】：
一种水稻核苷酸片段人工加接头的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：1)以含目的片段的水稻基因组或者cDNA为模板，该片段用P1表示，模板用D1表示，用扩增目的片段的前后引物、高保真酶进行PCR扩增，该前后引物分别用S1F和S1R表示；经1％琼脂糖胶电泳检测胶回收与预期大小一致的条带，胶回收产物用P2表示；2)将S1F和S1R分别与包含有重组位点同源序列、线性化质粒酶切位点序列的接头连接，进行人工合成，前后引物的接头分别用J1和J2表示；合成的带接头的引物用S2F和S2R表示；3)以P2为模板，S2F和S2R为引物，用高保真酶进行PCR扩增；经1％琼脂糖胶电泳检测、胶回收与预期大小一致的条带，胶回收产物用P3表示；4)P3就是在目标片段两侧加上接头的目的产物，用它与线性化的质粒连接，进行后面的基因工程操作。
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