[发明专利]一种快速简易的拟南芥完整叶绿体的提取方法在审
| 申请号： | 201611010468.4 | 申请日： | 2016-11-17 |
| 公开（公告）号： | CN106676054A | 公开（公告）日： | 2017-05-17 |
| 发明（设计）人： | 彭昌操;杨紫薇;刘思雯;朱其金;董甜甜;宋亚男;郑丹菁 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04 |
| 代理公司： | 广东广信君达律师事务所44329 | 代理人： | 杨晓松 |
| 地址： | 510642 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明属于细胞生物学、生物化学和分子生物学等技术领域，公开了一种快速简易的拟南芥完整叶绿体的提取方法。其中包括以下操作步骤：(1)将拟南芥叶片在Medium I中低速匀浆；(2)过滤之后1500g 4℃水平离心5min；(3)叶绿体沉淀用Medium II悬浮后，在40％/80％percoll梯度中3000g 4℃水平离心30min。(4)吸出完整叶绿体，用SH buffer洗涤两次；(5)叶绿体沉淀用SH buffer悬浮后色素定量。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 快速 简易 拟南芥 完整 叶绿体 提取 方法 | ||
【主权项】：
一种快速简易的拟南芥完整叶绿体的提取方法，其特征在于，包括以下操作步骤：(1)用具预冷；(2)在培养箱光周期开始2‑3h时，取3‑4周的拟南芥叶片，置于冰上；(3)然后在匀浆机中加入200ml的Medium I(缓冲液I)，低速匀浆；(4)使用miracloth(神奇滤布)或者纱布过滤，1500g水平离心5min，沉淀为墨绿色粗叶绿体，上清为浅绿色。(5)尽量去除上清，沉淀用约5ml的Medium II(缓冲液II)轻柔悬浮；(6)配置40％/80％percoll(细胞分离液)梯度，将样品上样至percoll梯度上层，3000g水平离心30min；(7)完整叶绿体位于上下两个percoll组分的交界处，将完整叶绿体吸出；用SH buffer(SH缓冲液)稀释3倍，1500g水平离心2min，沉淀重悬于25ml SH buffer，1000g离心1min；(8)沉淀用适量SH buffer悬浮(约5‑10ml)，可以立即镜检观察叶绿体，并色素定量。
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