[发明专利]一种面粉中偶氮甲酰胺的比色检测方法

摘要

本发明属于食品添加剂的检测领域，特别是涉及一种面粉中偶氮甲酰胺的比色检测方法。本发明利用谷胱甘肽与纳米金粒子表面形成共价键，使金纳米粒子形成自组装网状结构，导致发生团聚，使纳米金溶液呈蓝色，以及偶氮甲酰胺可以和谷胱甘肽产生偶合反应的原理；通过控制反应条件使得偶氮甲酰胺和固定浓度的谷胱甘肽完全反应，消耗谷胱甘肽的量，使谷胱甘肽无法诱使金纳米溶液产生完全团聚，从而呈现一定的红色；然后通过裸眼观测纳米金溶液颜色或利用紫外可见分光光度计在400‑800 nm波长范围内扫描纳米金溶液的吸收光谱，建立定量分析模型，从而实现对偶氮甲酰胺的快速检测。本方法具有灵敏度高、简单快速和低成本等优点。

主权项

1.一种面粉中偶氮甲酰胺的比色检测方法，其特征在于：具体步骤如下：（1）样品前处理：称取0.1g 面粉于50 mL离心管中，加入10 mL丙酮，摇床30oC，200rpm振揺20分钟，然后超声15分钟，离心，取上清液5 mL，40 oC氮吹近干后加入 H2O 定容成5 mL，用0.45μm滤膜将溶液进行过滤，在滤液中加入三价砷溶液，振揺20 min；（2）制备样品检测液：在1.5 mL 的离心管中，加入100μL 15μM的谷胱甘肽溶液，然后加入100μL步骤（1）样品溶液，混合均匀，置于50 oC恒温振荡器振荡1 小时；接着加入100μL 浓度为20 mmol/L 的Britton‑Robison缓冲溶液，混合均匀；最后，加入300μL纳米金溶液，40分钟后通过目视观测溶液颜色，同时，用紫外‑可见分光光度计在400‑800 nm范围内扫描溶液的吸光度；（3）建立定性和定量分析模型：取8个1.5 mL 的离心管中，分别加入100μL 15μM的谷胱甘肽溶液，然后分别加入100μL不同浓度的偶氮甲酰胺标准溶液，混合均匀，置于50 oC恒温振荡器振荡1 小时；接着分别加入100μL 浓度为20 mmol/L 的Britton‑Robison缓冲溶液，混合均匀；最后，分别加入300μL纳米金溶液，40分钟后目视观测不同浓度的偶氮甲酰胺标准溶液的颜色，同时用紫外‑可见分光光度计在400‑800 nm范围内扫描溶液的吸光度，计算溶液在520nm和668nm处吸光度的比值（A520/A668）；然后，以偶氮甲酰胺浓度为横坐标、 A520/A668作为纵坐标做出标准工作曲线；（4）进行定性和定量分析：通过目视观测溶液颜色，对比不同浓度偶氮甲酰胺标准溶液的颜色，目视检测步骤（2）样品溶液中偶氮甲酰胺的含量；同时，利用步骤（2）的样品溶液在520nm和668nm处吸光度的比值（A520/A668），对照标准工作曲线求出溶液中偶氮甲酰胺的含量。