[发明专利]一种建立人多能干细胞诱导分化为成熟血细胞的方法

摘要

本发明属于血细胞的诱导分化领域，提供一种建立人多能干细胞诱导分化为成熟血细胞的方法，包括两大步骤A. 人多能干细胞诱导分化为CD31、CD34的造血祖细胞；B. CD31、CD34的造血祖细胞诱导分化为人成熟血细胞。本发明提供的方法采用了单层细胞培养结合悬浮细胞培养的两步法诱导方式，简化了诱导程序，缩短了诱导时间，操作简单，具有高效、稳定的技术特点，采用无饲养层细胞的诱导分化体系，诱导得到的血细胞具备生物安全保障，能够满足临床转化和临床实验的要求，医学转化价值高。

主权项

一种建立人多能干细胞诱导分化为成熟血细胞的方法，其特征在于：包括以下步骤：A. 人多能干细胞诱导分化为CD31、CD34的造血祖细胞：诱导使用的人多能干细胞均为无饲养层的培养基1体系，培养人多能干细胞后，接入预先铺好四型胶原的培养皿中，移入CO2培养箱培养24小时后，更换BVF‑M培养基，记为0天，然后每两天更换BVF‑M培养基，培养6天；B. CD31、CD34的造血祖细胞诱导分化为人成熟血细胞：将步骤A获得的细胞重悬后与BGM培养基混匀，加入6孔板中，置于CO2培养箱中进行培养；其中，所述培养基1为以Matrigel为基质的mTeSR1培养基；步骤A所述的BVF‑M培养基以Stemline II hematopoietic medium为基础培养液配制成的，含有BMP4 50 ng/mL、VEGF 50 ug/mL、bFGF 50 ng/mL；步骤B所述的BGM培养基含有：100 mL  hematopoietic CFC medium与1 mL 青霉素和链霉素混合、100 µL 浓度为50 ug/mL 的VEGF、200 µL浓度25 ug/mL 的Flt3 ligand和 250 µL浓度为8 ug/mL 的bFGF。