[发明专利]一种以SGLT2蛋白为靶点的抗糖尿病药物筛选细胞模型及其制备和应用有效
| 申请号： | 201611024059.X | 申请日： | 2016-11-14 |
| 公开（公告）号： | CN106520701B | 公开（公告）日： | 2019-06-21 |
| 发明（设计）人： | 闫亚平;冯正平;李科 | 申请（专利权）人： | 陕西脉元生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867;C12N15/65;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 西安通大专利代理有限责任公司 61200 | 代理人： | 王霞 |
| 地址： | 710065 陕西省西安市高新区*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种以SGLT2蛋白为靶点的抗糖尿病药物筛选细胞模型及其制备和应用，属于生物医药工程技术领域。该细胞模型是以具有组成型活性的慢病毒颗粒为基础，感染panc‑1细胞，构建得到；所述具有组成型活性的慢病毒颗粒为带有人源SGLT2基因、报告基因以及筛选基因的慢病毒颗粒。是通过慢病毒建立的稳定高表达目的蛋白(SGLT2)的细胞模型，与转染和同源重组相比，提高了基因整合效率，缩短了筛选时间；该模型通过绿色荧光蛋白(eGFP)的表达和筛选基因(puro)的筛选(嘌呤霉素)双重控制，更好保证了目的蛋白(SGLT2)在目的细胞(panc‑1)中的高表达水平。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 sglt2 蛋白 糖尿病药物 筛选 细胞 模型 及其 制备 应用 | ||
【主权项】：
1.一种以SGLT2蛋白为靶点的抗糖尿病药物筛选细胞模型，其特征在于，该细胞模型是以具有组成型活性的慢病毒颗粒为基础，感染panc‑1细胞，构建得到；所述具有组成型活性的慢病毒颗粒为带有人源SGLT2基因、报告基因以及筛选基因的慢病毒颗粒；所述报告基因为绿色荧光蛋白eGFP，其与人源SGLT2基因通过T2A连接；所述筛选基因为嘌呤毒素puro，通过EF1启动子启动；所述慢病毒颗粒为PCDH慢病毒包装系统，该慢病毒颗粒浓缩后滴度为5*108TU/ML；所述慢病毒颗粒是通过Not I和N he I酶切位点，利用双酶切、胶回收、连接、转化操作，将带有人源的SGLT2基因插入到包含eGFP‑EF1‑puro基因的慢病毒表达载体上，获得pCDH‑SGLT2‑eGFP‑puro慢病毒颗粒。
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