[发明专利]一种检测鉴别猪脐带血中猪瘟病毒野毒株与疫苗株的双重实时荧光RT‑PCR试剂盒及其用途

摘要

本发明公开了一种检测鉴别猪脐带血中猪瘟病毒野毒株与疫苗株的双重实时荧光RT‑PCR试剂盒及其用途。该试剂盒包括一对引物和两条荧光探针，其中一对引物的序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，两条荧光探针的序列如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示。本发明试剂盒具有特异性强、灵敏度高、准确度高和重复性优的优点，同时本发明对同一个样品进行一次检测操作即可完成猪瘟病毒野毒株和疫苗株的鉴别检测，而且能够解决猪瘟病毒与同属的牛病毒性腹泻病毒和羊边界病病毒存在基因交叉的问题。本发明适用于科学研究及临床检测中对猪瘟病毒野毒株及疫苗株的快速鉴别检测，可用于精准评估和诊断母猪猪瘟病毒带毒排毒、仔猪潜在感染情况，还可应用于猪瘟疫苗的效果评估。

主权项

一种检测鉴别猪脐带血中猪瘟病毒野毒株与疫苗株的双重实时荧光RT‑PCR试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括扩增引物和特异性荧光探针，所述扩增引物和特异性荧光探针的序列如下所示：上游扩增引物CSFV‑F：5’‑GCCATGCCCATAGTAGGA‑3’，其为SEQ ID NO:1序列；下游扩增引物CSFV‑R：5’‑CTACTGACGACTGYCCTGTA‑3’，其为SEQ ID NO:2序列，其中Y＝C/T；特异性荧光探针CSFV‑LV：VIC‑5’‑TGGCTAGTCCCTCCGTTTTGC‑3’‑BHQ1，其为SEQ ID NO:3序列，其中VIC为荧光报告基团，BHQ1为非荧光淬灭基团；特异性荧光探针CSFV‑Wt：FAM‑5’‑ACGGCTAGTCCCTCCGTTTG‑3’‑BHQ1，其为SEQ ID NO:4序列，其中FAM为荧光报告基团，BHQ1为非荧光淬灭基团。