[发明专利]一种人原代胃癌细胞的分离及培养方法在审
| 申请号： | 201611032931.5 | 申请日： | 2016-11-15 |
| 公开（公告）号： | CN108070560A | 公开（公告）日： | 2018-05-25 |
| 发明（设计）人： | 不公告发明人 | 申请（专利权）人： | 江苏齐氏生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/09 | 分类号： | C12N5/09 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214434 江苏省江阴市东盛*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种人原代胃癌细胞的分离及培养方法，包括以下步骤：(1)组织处理器械消毒；(2)用手术剪分离胃癌组织，将组织放入预冷无菌含双抗的PBS液中洗涤数次除去血渍和坏死组织；(3)剪碎组织，并用预热的IV型胶原酶酶和胰蛋白酶分别消化；(4)终止消化，离心，弃上清；(5)细胞计数后接种到包被后的培养瓶；(6)置于37℃、5％CO2环境中培养；(7)细胞纯化；(8)细胞传代培养；(9)细胞形态学观察；(10)细胞存活率测定；(11)免疫学鉴定。本发明提供的一种人胃癌细胞的分离及培养方法，操作简单，所得细胞数量多，成活率高，是一种理想的人胃癌细胞原代分离与培养方法，为实验提供可靠的细胞资源。 | ||
| 搜索关键词： | 人胃癌细胞 胃癌细胞 细胞 胰蛋白酶 细胞形态学观察 血渍 免疫学鉴定 细胞存活率 消化 坏死组织 器械消毒 胃癌组织 细胞传代 细胞纯化 原代分离 组织处理 培养瓶 手术剪 预热的 包被 放入 剪碎 双抗 无菌 预冷 成活率 洗涤 接种 并用 | ||
【主权项】：
1.一种人原代胃癌细胞的分离及培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将组织处理器械浸泡于浓度75％乙醇水溶液，再置于无菌操作台紫外灭菌30min，将器械取出，在无菌操作台里晾干；(2)将组织放入预冷无菌含双抗PBS液中，培养皿置于冰上洗涤除去表面的血管、坏死组织和间质组织，无菌条件下在预冷的PBS中用眼科剪将胃癌组织剪成1mm×1mm×1mm的碎块；(3)用37℃预热的胶原酶和含二乙烯四乙酸二钠的胰蛋白酶分别消化，每隔10min吹打一次；(4)用含胎牛血清、双抗、胰岛素的混合培养基(简称混合培养基)终止消化，所得滤液250～350g离心5min，去掉上清液，保留沉淀，重复两次；(5)细胞计数后接种细胞至铺多聚赖氨酸包被的的培养瓶中，置于37℃、5％CO2 环境中继续培养，每2～3d换一次液；；(6)细胞纯化：酶消化法；(7)细胞传代培养；(8)细胞形态及生长情况观察；(9)细胞存活率的测定；(10)胃癌细胞免疫学鉴定。
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