[发明专利]一种桉叶油素型油樟芽器官组培芽繁殖方法

摘要

本发明公开了一种桉叶油素型油樟芽器官组培芽繁殖方法，其特征在于包括外植体选择、外植体处理、初代芽诱导培养、增殖培养和壮芽培养，采集桉叶油素型油樟树的树冠外围生长健壮、无病虫危害的当年生嫩枝作为外植体，对外植体进行修剪、灭菌消毒处理后接种于初代芽诱导培养基中获取初代芽，再将初代芽接种于增殖培养基中经过5‑6个周期增殖培养，形成丛生芽，将丛生芽接入壮芽培养基中培养，形成大量高≥2cm健壮的单芽。本发明操作过程简便，培养周期短，继代芽产量大,并且质量优，增殖系数达到4以上的组培苗产业化技术要求，具有很好的经济效益、生态效益和社会效益。

主权项

一种桉叶油素型油樟芽器官组培芽繁殖方法，其特征在于：包括外植体选择、外植体处理、初代芽诱导培养、增殖培养和壮芽培养，采集桉叶油素型油樟树的树冠外围生长健壮、无病虫危害的当年生嫩枝作为外植体，对外植体进行修剪、灭菌消毒处理后接种于初代芽诱导培养基中获取初代芽，再将初代芽接种于增殖培养基中经过5‑6个周期增殖培养，形成丛生芽，将丛生芽接入壮芽培养基中培养，形成大量高≥2cm健壮的单芽，具体操作步骤如下：（1）外植体选择：在至少连续3天晴朗的气候里，采集桉叶油素型樟树的树冠外围生长健壮、无病虫危害的当年生嫩枝作为外植体；（2）外植体处理：将外植体置于自来水下冲洗10‑15 min，然后去除外植体叶片，将外植体置于体积浓度0.2%次氯酸钠溶液中浸泡10‑15min后，用纯净水冲洗外植体4‑5次，然后在体积浓度0.1%代森锌蓝粉溶液中浸泡15‑20min，用纯净水冲洗外植体4‑5次后，裁成带至少1个腋芽，1.5‑3cm长的茎段，视茎段木质化程度分类置放容器内；在无菌条件下，用体积浓度0.15 % HgCl2+30 mg/L VC的混合溶液对外植体浸泡15‑20min进行灭菌消毒，最后用无菌水冲洗干净外植体后，置于无菌滤纸上吸干水，备用；（3）初代芽诱导培养：将步骤（2）得到的外植体接种于初代芽诱导培养基中培养，初代芽诱导培养方法为：首先将接种好的外植体置于4‑8 ℃的低温环境,暗培养8‑10 d，再转入温度22‑25 ℃,光照强度1000‑2000 lux,光照10‑12 h/d的条件下培养，培养40‑50 d，初代芽萌发、生长；（4）增殖培养：将高≥1cm的初代芽接入增殖培养基中进行增殖培养，增殖培养方法为：将接种好的初代芽置于温度25‑28℃，光照强度1000‑3000 lux，光照12‑14 h/d的条件下培养，25‑30 d转接一次，循环往复，经5‑6个周期的培养，形成丛生芽；（5）壮芽培养：将步骤（4）得到的丛生芽进行切割，4‑5颗芽/丛，插入壮芽培养基中，置于温度25‑28 ℃，光照强度4000‑7000 lux，光照12‑14 h/d的环境中培养，培养30‑35 d，获得大量壮芽。