[发明专利]CTLA‑4抗体FAB在昆虫表达系统中的制备方法在审
| 申请号： | 201611045157.1 | 申请日： | 2016-11-24 |
| 公开（公告）号： | CN106432499A | 公开（公告）日： | 2017-02-22 |
| 发明（设计）人： | 王涛;汪俊;陈春麟;周南梅 | 申请（专利权）人： | 上海美迪西生物医药股份有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/28 | 分类号： | C07K16/28;C07K1/22;C07K1/16;C12N15/866 |
| 代理公司： | 上海瀚桥专利代理事务所(普通合伙)31261 | 代理人： | 郑优丽;熊子君 |
| 地址： | 201299 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及CTLA‑4抗体FAB 在昆虫表达系统中的制备方法，包括：（a）将N端分别带有信号肽的Fab片段的轻链与重链的氨基酸序列的基因克隆于带有双启动子的杆状病毒表达载体内构建重组表达载体；（b）将所得的重组表达载体转座至感受态细胞中，筛选重组菌斑，提取重组质粒，并将其转染至昆虫细胞中，得到重组杆状病毒后进一步扩增病毒，并使用病毒感染放大培养的昆虫细胞以表达Fab蛋白，离心收集含Fab蛋白的上清产物；（c）将所得昆虫细胞表达上清首先使用膜包进行超滤浓缩和置换缓冲溶液，然后色谱柱纯化，即可得到全人源单克隆抗体CTLA‑4单抗Fab片段。 | ||
| 搜索关键词： | ctla 抗体 fab 昆虫 表达 系统 中的 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种使用昆虫细胞/杆状病毒表达系统制备重组CTLA‑4 抗体Fab片段的方法，其特征在于，包括：（a）将N端分别带有信号肽的Fab片段的轻链与重链的氨基酸序列的基因克隆于带有双启动子的杆状病毒表达载体内构建重组表达载体；（b）将所得的重组表达载体转座至感受态细胞中，筛选重组菌斑，提取重组质粒，并将其转染至昆虫细胞中，得到重组杆状病毒后进一步扩增病毒，并使用病毒感染放大培养的昆虫细胞以表达Fab蛋白，离心收集含Fab蛋白的上清产物；（c）将所得昆虫细胞表达上清首先使用膜包进行超滤浓缩和置换缓冲溶液，然后色谱柱纯化，即可得到全人源单克隆抗体CTLA‑4单抗Fab片段。
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