[发明专利]一种绿侧花海葵抗前列腺癌寡肽的制备方法有效
| 申请号： | 201611045752.5 | 申请日： | 2016-11-24 |
| 公开（公告）号： | CN106560518B | 公开（公告）日： | 2020-02-07 |
| 发明（设计）人： | 丁国芳;吴宗泽;杨最素;贾盈露;郑媛媛;陈锐;余方苗 | 申请（专利权）人： | 浙江海洋大学 |
| 主分类号： | C12P21/06 | 分类号： | C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/18;C07K1/16 |
| 代理公司： | 33109 杭州杭诚专利事务所有限公司 | 代理人： | 尉伟敏;赵越剑 |
| 地址： | 316000 浙江省舟*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种绿侧花海葵抗前列腺癌寡肽的制备方法，步骤包括：(1)样品预处理；(2)酶解；(3)超滤；(4)阴离子交换层析；(5)SephadexG25凝胶层析；(6)反相高效液相色谱分离纯化；最终获得绿侧花海葵抗前列腺癌寡肽。本发明安全性好，反应条件温和，过程控制容易，所得绿侧花海葵抗前列腺癌寡肽纯度高，对前列腺癌细胞DU‑145有明显的增殖抑制作用，具有较好的医学应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 花海 前列腺癌 寡肽 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种绿侧花海葵抗前列腺癌寡肽的制备方法，其特征在于，步骤如下：/n(1)样品预处理：新鲜野生绿侧花海葵经预处理后得海葵肉浆；/n(2)酶解：按照每克海葵肉浆加4-5mL纯净水的配比，将海葵肉浆与纯净水混匀，调节pH＝10-11，按照每克海葵肉浆加2000-2500U的加酶量加入碱性蛋白酶，35-45℃酶解4-6小时得酶解液；/n(3)超滤：酶解液灭活，离心，取上清液，经超滤获得分子量小于8kd的活性组分；/n(4)阴离子交换层析：分子量小于8kd的活性组分经DEAE-Sepharose FastFlow阴离子交换层析，洗脱，于280nm检测吸光度，并根据吸光度曲线合并洗脱峰，对收集得到的各洗脱峰产物冷冻干燥，MTT法筛选对前列腺癌细胞DU-145增殖抑制率最高的阴离子交换层析产物；/n(5)SephadexG25凝胶层析：将对前列腺癌细胞DU-145增殖抑制率最高的阴离子交换层析产物采用G-25凝胶层析继续分离纯化，超纯水洗脱，于280nm检测吸光度，并根据吸光度曲线合并洗脱峰，对收集得到的各洗脱峰产物冷冻干燥，MTT法筛选对前列腺癌细胞DU-145增殖抑制率最高的Sephadex G25凝胶层析产物；/n(6)反相高效液相色谱分离纯化：对前列腺癌细胞DU-145增殖抑制率最高的SephadexG25凝胶层析产物经滤膜过滤后用反相高效液相色谱分离纯化，最终获得绿侧花海葵抗前列腺癌寡肽；所述绿侧花海葵抗前列腺癌寡肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示：Tyr-Val-Pro-Gly-Pro。/n
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