[发明专利]一种动物源食品中99种兽药残留的高通量检测方法

摘要

本发明公开了一种动物源食品中99种兽药残留的高通量检测方法，特点是具体步骤如下（1）基于载体辅助液液萃取技术通过一次性前处理，完成涵盖了理化性质差异很大的常见8大类，共计99种兽药残留的提取、净化工作；（2）混合标准溶液组成和基质标准曲线制备；（3）利用超高效液相色谱‑三重四极杆串联质谱联用测定待测样品中99种兽药残留的浓度；优点是该方法的前处理和仪器分析过程针对不同理化性质的化合物兼容性强，检测效率高，可操作性强，检测限能满足所有受试的目标物并且降低了检测成本。

主权项

一种动物源食品中99种兽药残留的高通量检测方法，其特征在于具体步骤如下：(1)样品前处理称取液体样品5.00g或者浓度为1g/mL的固体水溶液5mL于50mL离心管中，加入5mL提取液，10mL乙腈，涡旋充分混匀，以4500r/min离心5min，上清液转移至另一50mL离心管中，再在上清液中加入1g硫酸铵，充分混匀后离心5min，得到上层乙腈相和下层水相，取下层水相过硅藻土柱，下接50ml离心管，并加入0.5ml二甲基亚砜得到上样液；将上样液上硅藻土柱后平衡15分钟，然后将上层乙腈相过硅藻土柱进行洗脱，再依次用10ml，10ml，6ml乙腈清洗离心管中残余的上样液后，清洗液上硅藻土柱后，洗脱液用纯乙腈定容至25ml；将定容液均分为2份，分别置于15ml具刻度离心管中，在微弱的氮气流下吹干至1ml，用纯水定容至2ml，取出1ml置于1.5ml离心管中，于‑4℃，15000r/min下离心10min，然后取400μL上清液置于带衬管的进样瓶中进样分析；同时做试剂空白样品；其中所述提取液的制备方法为：称取4.3g的草酸和3.7g的乙二胺四乙酸二钠，用500ml的水溶解，氨水调pH至3.0；(2)混合标准溶液组成和基质标准曲线制备A.混合标准溶液组成：磺胺类包括磺胺嘧啶，磺胺甲嘧啶，磺胺二甲嘧啶，磺胺二甲异嘧啶，磺胺醋酰，磺胺吡啶，磺胺二甲氧嘧啶，磺胺多辛，磺胺间甲氧嘧啶，磺胺对甲氧嘧啶，磺胺喹恶啉，磺胺二甲恶唑，磺胺二甲异恶唑，磺胺甲恶唑，磺胺噻唑，磺胺氯哒嗪，磺胺甲噻二唑，磺胺苯甲酰，磺胺苯吡唑，三甲氧苄胺嘧啶和磺胺胍，各成分浓度均为1.0μg/mL；喹诺酮类包括乙胺嘧啶,环丙沙星,恩诺沙星,氧氟沙星,诺氟沙星,沙拉沙星,培氟沙星,奈啶酸,奥索利酸,氟甲奎,吡哌酸,西诺沙星,麻保沙星,司帕沙星,双氟沙星,单诺沙星,奥比沙星,洛美沙星和依诺沙星，各成分浓度均为1.0μg/mL；激素类包括可的松，泼尼松，甲基泼尼松龙，炔诺酮，炔雌醇，醋酸美仑孕酮，己烷雌酚，己二烯雌酚，醋酸甲羟孕酮，雌酮，氢化可的松，孕酮，雌三醇，地塞米松，醋酸甲地孕酮，睾酮，泼尼松龙，雌二醇，己烯雌酚，甲睾酮，表睾酮，丙酸睾酮，苯甲酸雌二醇，追宝龙，诺龙，甲孕酮和17α‑羟基孕酮，各成分浓度均为0.1μg/mL；红霉素类包括红霉素，替米考星，竹桃霉素，泰乐霉素，克林霉素，螺旋霉素，吉他霉素，交沙霉素，林可霉素和泰妙菌素，各成分浓度均为0.1μg/mL；孔雀石绿类包括孔雀石绿，隐色孔雀石绿，结晶紫和隐色结晶紫，各成分浓度均为0.1μg/mL；青霉素类包括氨苄青霉素，乙氧萘青霉素，邻氯青霉素，头孢氨苄，双氯青霉素，青霉素G和阿莫西林，各成分浓度均为1.0μg/mL；四环素类包括土霉素，强力霉素，金霉素和四环素，各成分浓度均为1.0μg/mL；氨苯砜类包括金刚乙胺，苯乙醇胺A，N‑乙酰氨苯砜，氨苯砜，金刚烷胺，吡喹酮和氯丙嗪，各成分浓度均为0.1μg/mL；B.基质标准曲线定量：在空白样品中分别加入上述8类混合标准溶液0μL，10μL，20μL，40μL，100μL，以浓度为横坐标，仪器响应值为纵坐标，做基质加标标准曲线，作为试样处理液中待测物浓度定量的依据；其中响应值＝标准品峰面积/标准品质量；(3)超高效液相色谱‑三重四极杆串联质谱联用测定A.高效液相分离色谱柱：Hypersile Gold C18色谱柱，若测定激素成分则采用的型号为100mmx 2.1mm,1.9μm，若测定混合标准溶液中的其余成分则采用的型号为100mmx 2.1mm,3μm；若测定激素成分，则流动相A：含有0.1wt％氨水的甲醇溶液；流动相B：含有0.1wt％氨水的水‑甲醇溶液，其中水与甲醇的体积比为95:5；若测定混合标准溶液中的其余成分则：流动相A：含有0.1wt％甲酸以及5mM乙酸铵的乙腈‑水溶液，其中乙腈与水的体积比为95:5；流动相B：含有0.1wt％甲酸以及5mM乙酸铵的水‑乙腈溶液，其中水与乙腈的体积比为95:5；流速：0.3mL/min；进样量：10mL；若测定激素成分HPLC洗脱程序如下：若测定混合标准溶液中的其余成分则HPLC洗脱程序如下：B.质谱检测离子源：HESI‑II；喷雾电压：若测定激素成分则采用正离子模式3800V/负离子模式2700V；若测定混合标准溶液中的其余成分则采用正离子模式3800V；气化温度：350℃；鞘气压：N2，35arb；辅助气压：N2，10arb；离子传输管管温度：300℃；质量范围：m/z 100‑1000；分辨率R＝70000；(4)浓度计算方法样品中待测物的含量根据如下计算公式(1)得到：X＝2*C*V/m，式中：X－试样中待测物含量，单位为μg/kg；C－试样处理液中待测物浓度，根据基质标准曲线计算得到，单位为μg/LV—定容体积，单位为mL；m－试样体积或质量，单位为g。