[发明专利]苹果酸酶重组菌及其构建方法和应用有效
| 申请号： | 201611046752.7 | 申请日： | 2016-11-23 |
| 公开（公告）号： | CN106591342B | 公开（公告）日： | 2019-05-10 |
| 发明（设计）人： | 刘立明;高聪;陈修来;胡贵鹏;郭亮;刘佳;罗秋玲 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/81;C12N1/21;C12N1/19;C12P7/46;C12R1/19 |
| 代理公司： | 苏州市中南伟业知识产权代理事务所(普通合伙) 32257 | 代理人： | 姚惠菱 |
| 地址： | 214000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种苹果酸酶重组菌的构建方法，包括以下步骤：对NADP依赖型苹果酸酶基因进行突变，得到苹果酸酶突变基因；将苹果酸酶突变基因与载体连接，然后在宿主菌中重组表达，得到苹果酸酶重组菌；本发明同时还请求保护采用上述方法构建的苹果酸酶重组菌以及一种生产L‑苹果酸的方法，包括以下步骤：将上述苹果酸酶重组菌在发酵培养基中进行好氧发酵；当苹果酸酶重组菌生长至OD600为0.4‑0.8时，进行诱导，然后再进行微好氧发酵。本发明所获得的苹果酸酶重组菌具有较高的催化丙酮酸羧化反应的能力，可显著提高菌体生产苹果酸的能力。 | ||
| 搜索关键词： | 苹果酸酶 重组菌 构建 突变基因 苹果酸 苹果酸酶基因 发酵培养基 微好氧发酵 催化丙酮 好氧发酵 载体连接 重组表达 羧化反应 宿主菌 依赖型 菌体 突变 诱导 生产 生长 应用 | ||
【主权项】：
1.一种苹果酸酶重组菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)对来源于拟南芥的NADP依赖型苹果酸酶基因NADP‑ME2编码的氨基酸在E129V、E129D、S209V、I407Y、A487S、A487Y或C490S处进行突变，得到苹果酸酶突变基因；(2)将所述苹果酸酶突变基因与载体连接，然后在宿主菌中表达，得到苹果酸酶重组菌。
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