[发明专利]一种植物根际盐碱土中木霉菌的快速分离方法

摘要

本发明提供了一种植物根际盐碱土中木霉菌的快速分离方法，主要通过植物根际盐碱土壤采集和取样方法；采集后土壤处理和土壤稀释液的制备；分离培养基的筛选和改良；分离菌株活化、培养和鉴定等技术的发明，以及不同土壤稀释液中木霉菌的分离菌落数量的测定，研发获得植物根际盐碱土中木霉菌快速分离技术。该技术可显著提高盐碱土中木霉菌的分离效率、分离速度、种类多样性，1000倍土壤稀释液可作为最佳的稀释浓度用于植物根际盐碱土中木霉菌快速分离，同时该方法简单、方便、易行。本研究可用于不同生境土壤和不同种类植物根际土壤中木霉菌的分离，进而解决了盐碱土中木霉菌分离效率低和分离技术难度大等问题，加快了木霉菌资源收集进度。

主权项

一种植物根际盐碱土中木霉菌的快速分离方法，其特征在于，包括以下步骤：A、取土样：将表层干土去除,取0‑20cm土层土壤，置于室温风干，并经网孔为1mm的筛子进行过筛处理；然后根据采集土壤的所属区域、土壤质地、作物和环境条件等对土样进行分类和编号，并对不同编号土样pH进行测定；B、配制土壤稀释液：准确称取待测盐碱土样l0g，放入装有90mL无菌水的150mL三角瓶中，并加入10个玻璃珠置于25℃摇床上130‑160rpm振荡1.5‑2.5h，使土壤中的微生物均匀分散，然后静置20‑30s，即为10倍土壤稀释液，再依此稀释为100和1000倍土壤稀释液备用；C、土壤稀释液中木霉菌的分离：采用“涂布法”将不同稀释倍数的土壤稀释液分别接种于PDA培养基进行分离培养；然后，将制备好的不同稀释倍数土壤稀释液分别吸取200uL均匀涂布于PDA培养基，并置于超净工作台风干150‑200s，待风干后置于25℃和16/8h光照和黑暗条件下培养；培养3天后分别记录接种不同稀释倍数土壤稀释液后每个培养基中木霉菌的菌落数量，并计算每份土样中木霉菌的分离效率，每份土样共设置3个处理，每个处理6个重复；D、木霉菌纯化：培养3天后，将培养基中菌落形态类似于木霉菌的菌落分别用接种针挑出接种于PDA培养基进行纯化培养，每个菌落6个重复；待菌落培养产孢后(5天左右)，用直径为0.5cm灭菌的打孔器制取木霉菌株的菌饼接种于PDA培养基进行二次纯化培养，每个菌落6次重复；二次纯化培养2天后开始记录每个菌落的形态特征，并每隔一天记录一次，同时用数码相机对其拍照记录菌落的形态特征；6天后，转接于斜面培养基4℃保存备用。