[发明专利]一种基于标准土样的土壤中假单胞菌的定量检测方法在审
| 申请号： | 201611052428.6 | 申请日： | 2016-11-24 |
| 公开（公告）号： | CN106520969A | 公开（公告）日： | 2017-03-22 |
| 发明（设计）人： | 王光飞;马艳;郭德杰;王秋君;宋修超 | 申请（专利权）人： | 江苏省农业科学院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/06;C12R1/38 |
| 代理公司： | 江苏圣典律师事务所32237 | 代理人： | 杨文晰,孙忠浩 |
| 地址： | 210014 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于标准土样的土壤中假单胞菌的定量检测方法，具体包括以下步骤首先制备假单胞菌浓度已知的标准土样，提取标准土样和待测土样DNA；再建立荧光定量PCR反应程序和反应体系，最后待测土样假单胞菌浓度的检测；本发明对假单胞杆菌常规平板涂布计数法进行改进，以假单胞菌浓度已知的标准土样绘制标曲从而定量检测待测土样中的假单胞菌，所得结果单位为菌数每克土，操作步骤高效、方便，同时准确的检测出土壤中假单胞菌浓度，宜于大规模推广应用。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 标准 土壤 中假单胞菌 定量 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种基于标准土样的土壤中假单胞菌的定量检测方法，其特征在于，具体步骤如下：a）分别制备假单胞菌浓度依次为5×107、5×106、5×105、5×104、5×103、5×102和50 CFU/mL的系列梯度标准土样；b）分别提取系列梯度标准土样DNA及待测土样DNA；c）分别以步骤b）中获得系列梯度标准土样DNA及待测土样DNA为模板，以SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2为上下游引物，进行荧光定量PCR反应；d）根据系列梯度标准土样假单胞菌浓度的对数值和相应的阈值循环数作图，获得标准曲线：将待测土样荧光定量PCR反应结果代入标准曲线，即可获得待测土样中假单胞菌的浓度。
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