[发明专利]一种水貂出血性肺炎灭活疫苗制备方法及其应用

摘要

本发明涉及一种水貂出血性肺炎灭活疫苗制备方法，还涉及一种上述制备方法所制得的灭活疫苗，还涉及一种上述灭活疫苗的应用。所述灭活疫苗的制备方法包括以下步骤(1)培养分离鉴定的铜绿假单胞菌强毒株ZHDL9；(2)灭活处理向菌液中缓慢加入甲醛灭活；(3)配苗将灭活检验合格的铜绿假单胞菌强毒株ZHDL9菌液离心，取上清液，向上清液中加入饱和硫酸铵溶液，离心，将沉淀的蛋白质用无菌生理盐水溶解，调整多组份蛋白浓度为500ug/ml，加入佐剂。本发明的优点是免疫范围广，降低成本，减少免疫接种次数从而减少应急，增加经济收入的效果。

主权项

一种水貂出血性肺炎灭活疫苗制备方法，包括以下步骤：(1)培养分离鉴定的铜绿假单胞菌强毒株ZHDL9：将分离鉴定的铜绿假单胞菌强毒株ZHDL9接种于LB琼脂培养基，无菌环境下挑选单菌落于液体培养基中，培养至细菌培养液在OD600处的吸光度值为0.6～0.8之间，再37℃扩大培养12h，然后25℃避光静止培养三天以上直至呈绿色荧光；(2)灭活处理：向铜绿假单胞菌菌液中缓慢加入甲醛灭活，边加入边震荡，使其充分混匀，直至甲醛溶液的终浓度为菌液体积总量的0.4％，置于37°摇床震荡处理，摇床转速160‑180r/min，灭活处理72小时，涂板检验菌液是否彻底灭活；(3)配苗：将灭活检验合格的铜绿假单胞菌强毒株ZHDL9菌液离心，取上清液，向上清液中加入饱和硫酸铵溶液，使上清液中的蛋白质沉淀，离心，取沉淀的蛋白质，将沉淀的蛋白质用无菌生理盐水溶解，调整多组份蛋白浓度为500ug/ml，加入佐剂，4度过夜，即得。