[发明专利]一种雷公藤原生质体的分离及瞬时转化方法

摘要

本发明公开了一种雷公藤原生质体的分离及瞬时转化方法。通过实验证明：利用本发明的分离方法得到的原生质体的产量为4.24×10⁵/g FW，活力为94.5％，通过PEG4000介导转化的方法成功将外源质粒转化到本发明提取的原生质体中并顺利表达，成功的建立了雷公藤悬浮细胞原生质体瞬时转化体系。本发明为深入开展雷公藤的功能基因组学研究奠定了基础，同时也为雷公藤进行基因编辑、亚细胞定位、基因过表达和干扰等研究提供了物质基础。

主权项

1.一种雷公藤原生质体的分离方法，包括如下步骤：1）用酶解液酶解雷公藤愈伤组织悬浮细胞，得到酶解后的雷公藤悬浮细胞；2）收集所述酶解后的雷公藤悬浮细胞中的沉淀，即得到雷公藤原生质体；所述酶解的时间为10h；所述酶解液由甘露醇、BSA、MES、CaCl₂•2H₂O、纤维素酶、果胶酶、离析酶和水组成；所述甘露醇在所述酶解液中的浓度为0.6mol/L；所述BSA在所述酶解液中的质量分数为0.6%；所述MES在所述酶解液中的质量分数为0.1%；所述CaCl₂•2H₂O在所述酶解液中的浓度为0.05mol/L；所述纤维素酶在所述酶解液中的质量分数为2.0%；所述果胶酶在所述酶解液中的质量分数为0.5%；所述离析酶在所述酶解液中的质量分数为0.5%。