[发明专利]固定化混合菌种联合发酵生产苯丙氨酸

摘要

本发明公开了一种利用固定化混合菌种联合发酵生产苯丙氨酸的方法，包含的生产步骤有：产氨短杆菌培养、深红酵母培养、混合菌种固定化、混合培养基的制备、流化床发酵、苯丙氨酸提纯。通过固定化混合菌种联合发酵生产苯丙氨酸，解决了单菌种发酵酶活不高且在高氨高pH条件下容易失活的缺点，并且固定化发酵也简化了发酵后苯丙氨酸的提纯工序。通过产氨短杆菌发酵尿素产生的氨作为氨源，深红酵母利用氨和添加的反式肉桂酸进行发酵，通过深红酵母产生的苯丙氨酸解氨酶发酵反式肉桂酸和氨产生苯丙氨酸。发酵全程不添加氨水和碳酸氢铵，不造成环境污染，且产物后提取工艺较现有技术及游离细胞发酵更加简单易行。

主权项

固定化混合菌种联合发酵生产苯丙氨酸，其特征在于，包含有如下步骤：（1）产氨短杆菌培养：将产氨短杆菌按照1%‑1.5%的接种量接入培养基中，于发酵罐内进行搅拌发酵，发酵完毕后离心得到产氨短杆菌菌体；（2）深红酵母培养：将深红酵母按照1.5%‑3%的接种量接入培养基中，于发酵罐内进行搅拌发酵，发酵完毕后离心得到深红酵母菌菌体；（3）混合菌种固定化：将步骤（1）和步骤（2）得到的产氨短杆菌菌体和深红酵母菌菌体按照1:2的比例进行混合，对混合菌体进行固定化处理；（4）混合培养基的制备：将大麦芽除杂，除去秸秆和杂草，再用粉碎机粉碎成细小颗粒状，以质量体积比为1:4（KG/L）的比例加入纯水，放入水浴锅中65℃保温糖化7小时并不断搅拌，以保证糖化均匀；使用4层纱布过滤除杂，将糖化液煮沸加入适量鸡蛋白作为吸附助滤剂，待冷却后，再用4层纱布过滤，即得到澄清的麦芽汁，再加入2%尿素、0.2%硫酸镁、2%葡萄糖、2%反式肉桂酸既得到混合培养基；（5）流化床发酵：将固定化的混合菌体放入发酵用流化床内，通入混合培养基进行流化床发酵；（6）苯丙氨酸提纯：发酵完成后，发酵液通过阳离子交换树脂洗脱收集，再进行喷雾干燥得到纯度为97.8%以上的苯丙氨酸。