[发明专利]一种降低深低温冻存组织器官冰晶损伤的方法

摘要

本发明提供了一种降低深低温冻存组织器官冰晶损伤的方法，本发明提供的这种低温冻存器官的处理方法，在器官待冷冻前使用干细胞条件培养基灌注，提高了组织细胞的生存状态，增加了抗凋亡能力，减少了细胞在离体后发生的氧化应激损伤；在复苏后立即使用含鲜活间充质干细胞的完全培养基进行后灌注处理，对冻存过程中受到冷冻保护剂毒性和渗透损伤的细胞进行主动修复，可有效减少细胞凋亡比率，减少组织结构的破坏。

主权项

一种降低深低温冻存组织器官冰晶损伤的方法，其特征在于，包括以下步骤：1) 将待冷冻的器官连接预冷至4℃的梯度浓度混合程控降温器官灌注仪，灌注25℃恒温的间充质干细胞条件培养基，灌注时间为30‑60 min；所述间充质干细胞条件培养基为传代5代内脂肪、脐带、脐血或骨髓中的一种的间充质干细胞，在传代后24h后长到70~80%汇合，更换无血清间充质干细胞培养基，48h后收集的培养上清，经1000~3000g离心10~30min，取上清后使用0.1µm~0.22µm微孔滤膜过滤后所得；2）然后向器官灌注预冷至4℃的冷冻保护剂，灌注时长30min；3）将处理完毕的器官放入冷冻袋，封口后置于程控降温仪中，按照设定降温程序进行程序化降温，待其温度降至‑80℃后投入液氮中存放；所述程控降温仪降温程序设定为①4℃平衡，②以1℃/min的速度降至0℃，并保持10min，③以2℃/min的速度降至‑18℃，保持15min，④以2℃/min速度降至‑45℃，保持15min，⑤再以5℃/min的速度降至‑90℃，保持5min；4）复苏器官时，将冻存器官自液氮取出后置于37℃水浴中，不断摇动；5）完全融化后再次进行灌注，灌注液为12‑25℃的含间充质干细胞条件培养基，灌注时间为30min‑60min；处理完成的器官可直接进行移植。