[发明专利]HBV病毒的检测方法、试剂盒及其应用

摘要

本申请公开了HBV病毒的检测方法,包括如下步骤从血清中分离得到核酸提取液，获取待测样本；采用荧光定量PCR仪检测反应结果，荧光信号收集时设定为Taqman荧光探针PgRNA‑FP 5’端荧光基团对应的荧光素，在60℃收集荧光信号；对结果分析。本发明的优点是根据HBV PgRNA多聚A进行特异性反转录，然后根据HBV PgRNA特异性引物和探针进行扩增，有效排除了HBV DNA带来的可能干扰，有效提高了检测HBV PgRNA特异性。

主权项

HBV病毒的检测方法,包括如下步骤：待测样本获取：将血清送检管振荡15s，彻底混匀后立即取200uL至1.5mL离心管中，向离心管内加入300uL裂解液、10μL蛋白酶K、4μL助沉剂和20uL磁珠1，漩涡振荡混匀离心管10秒，于室温轻柔颠倒混匀10min，使磁珠和核酸充分结合。将离心管放在磁力架上，反复颠倒磁力架将离心管盖上的磁珠冲洗下来，静置1min后弃去上清液。加入500uL洗液1，漩涡振荡3～5s使磁珠重新悬浮，然后置于磁力架上，反复颠倒磁力架将离心管盖上的磁珠冲洗下来，静置1min后弃去上清液。加入500uL洗液2，漩涡振荡3～5s使磁珠重新悬浮，然后置于磁力架上，反复颠倒磁力架将离心管盖上的磁珠冲洗下来，静置1min后弃去上清液，并尽量吸弃管底残余液体，晾干5min。加入50uL洗脱液，用移液枪缓慢吹打管壁上的磁珠使之浸于洗脱液中，55℃温育5min，期间轻轻晃动溶液两次使核酸充分洗脱。将离心管置于磁力架上静置1min，磁分离后及时将上清液转移至新的无核酸酶离心管中，得到核酸提取液。结果检测：采用荧光定量PCR仪检测反应结果，荧光信号收集时设定为Taqman荧光探针PgRNA‑FP 5’端荧光基团对应的荧光素，在60℃收集荧光信号；对结果分析。